细胞培养支原体污染
——来源——
（1）工作环境的污染，实验器材带来的污染；
（2）操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）；
（3）已受污染的培养基、血清，或用来制备细胞的原始组织或器官的污染；
（4）污染支原体的细胞造成的交叉污染。
——危害——
（1）细胞系支原体污染的平均比例为30-60%；
（2）《Nature》等期刊要求细胞实验必须做支原体检测；
（3）支原体污染细胞后，几乎能影响每一个细胞参数：
a、细胞染色体的异常和损伤
b、MTT实验结果严重错误
c、L-Arginine的代谢受影响
d、200个基因表达差异达2倍以上
e、PH值改变
——检测——
检测方法
（１）PCR法：提取细胞培养液，提取支原体，制备样品，根据支原体高度保守的 16SrRNA序列设计引物（避免真核细胞或细菌DNA干扰），设置阴性，阳性对照，扩增产物经电泳后成像观察，可识别已发现的几乎全部100余种支原体。
（２）化学发光法:裂解支原体后，有底 物情况下，支原体特异性的酶，能将ADP 转化成ATP。ATP参与荧光素酶（Luciferase）催化底物荧光素（Luciferin）产生光的过程，所以可以通过催化底物荧光素导致的生物发光（Bioluminescence）信号来判别支原体DNA存在与否。
（３）Quick Cell快速检测法:拓扑酶环化支原体DNA，在根据高保守区设计的引物引导下，采用特殊等温DNA扩增酶，61℃条件下，连续滚环式扩增支原体DNA 60分钟，根据有无支原体污染，随着扩增进程可目视实验结果。
概述
PCR法:
（1）较高的检出准确率；正确率大于85%
（2）需制备样品；
（3）PCR反应易受培养基成分抑制，产生假阴性。
化学发光法：
（1）快速，准确,正确率大于99.9%
（2）有特定设备要求，物流储存条件高。
Quick Cell快速检测法（李记生物独家研发）：
（1）准确，正确检出率大于99%
（2）快速，一步操作，一小时反应，目视结果，几乎不用任何设备，任何实验室均可操作
（3）简便，不需制备样品，反应不受细胞代谢产物影响
预防措施
根据可能的支原体污染来源，在体外细胞培养过程中，要严格控制环境污染、实验操作；细胞培养基和实验器材、耗材要保证无菌；在不影响实验结果的前提下，可在细胞培养基中加入适量的特定抗生素；发现支原体污染后，要清除支原体，防微杜渐。
去除措施
因为支原体没有细胞壁，一般用于细胞壁合成的抗生素对支原体没有作用，如青霉素、万古霉素多粘菌素（polymycin）、利福平、磺胺药物普遍没什么效果。对支原体最有抑制活性及常用于支原体去除的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些氟喹诺酮。在低浓度时，这些抗生素不会产生耐药性，且对哺乳动物细胞的毒性较小。四环素和大环内酯能结合30S和50S核糖体亚基，从而抑制支原体蛋白质合成，喹诺酮抑制DNA旋转酶。因此可以在DNA复制及蛋白质合成两个层面上抑制支原体生长，明显增强除菌效果。
选择支原体去除试剂需要注意几个关键几点：
①细胞毒性小，毒性大的试剂在去除支原体的同时，会杀死细胞；
②支原体去除效果，选择广谱试剂，去除多种支原体，以及细菌，真菌等；
③操作简便，没有二次污染；要考虑操作使用是否方便，因为如果使用起来比较麻烦，首先是费时费力，另外可能会带来二次污染。
支原体去除&预防试剂可选：
（1）李记生物的Quick Cell支原体预防/去除试剂
（2）美国GenDEPOT公司的Cellmaxin
（3）罗氏公司的BM-Cyclin，Biolnd的BIOMYC-1,BIOMYC- 2,BIOMYC-3
（4）罗氏公司的Invivogen 公司的Plasmocin™ prophylactic 和Plasmocin™ treatment
试剂功效
1、Quick Cell支原体预防及去除试剂和Cellmaxin都是从蛋白和DNA两个层面去除支原体，抗菌谱广。
不同在于：Quick Cell的使用者可以灵活选择单独或联合使用两种成分，分别或同时在蛋白或DNA层面去除支原体污染，细胞毒性更小。作用周期1-2周，支原体去除率大于92%。去除预防兼顾
2、BM-Cyclin包含泰妙菌素（BM-Cyclin 1）和二甲胺四环素（BM-Cyclin 2）两种成分，抑制支原体及细菌生长，高效去除培养细胞中已感染的支原体。 适用于多种培养细胞，无明显副作用，又不影响细胞本身的代谢，而且处理过的细胞不会重新感染支原体。BM-Cyclin需联合使用，作用周期2周，可消除80%以上的支原体。不确定能否预防。
3、BIOMYC-1基于抗生素泰妙菌素。 由真菌pleurotus mutilus 产生。 BIOMYC-2基于二甲胺四环素，四环素衍生物。 此两种抗生素溶液通常按先后联合使用2－3次循环约一周以上，可取得良好的效果。 BIOMYC-3 基于抗生素环丙沙星，属于氟喹酮类。 许多支原体被证明对BIOMYC-3敏感，需要根据支原体种类使用。处理周期2周，能去除90%的支原体。是否可以预防支原体目前还不能确定。
4、Plasmocin™ prophylactic和Plasmocin™ treatment也是两种抗生素的混合物。包含两个针对支原体的有效成分，作用于蛋白质合成和DNA复制阶段，对许多细菌和真核细胞则没有影响。作用周期2周，去除效率未知。有两个浓度包装，去除用高浓度，预防用低浓度。
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