1、实验室如何选择适合的血清?

在国内公认最好的血清是GIBCO和HYCLONE,知名度和使用范围非常普遍,但是价格普遍偏贵。life-ilab这个品牌是李记生物的自主品牌,国外直接贴牌,在20多个品牌中选择质量最优、批间差异最小的大量采购,最大程度降低批次间差异。研发小组及广大的科研客户使用反馈效果很好,价格实惠!对于特殊的细胞李记生物采购GIBCO或HYCLONE血源,同样经过检测,用实在的实验数据确定采购批次,而不是迷信品牌。

2、胎牛血清和小牛血清的区别及注意事项?

来源不同:新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14天的小牛,而胎牛血清(FBS)是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清。

组份与比例不同:两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同,

使用浓度不同:一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。

注意事项:某些细胞必需胎牛血清才能生长,而有些细胞只需小牛血清即可。

3、怎样储存和解冻血清避免产品质量受损?

首先需要将血清产品从冷冻箱中取出,先放置于2~8℃冰箱使之溶解,然后放在室温中使之全融。在融解过程中需要不定时的轻微晃动,使血清成分均匀,减少融化过程中产生沉淀机会。

其次,血清长时间存放于2-8℃时,可能会聚集各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)而形成沉淀或可见的混浊。因此,我们推荐长期储存血清需在-20℃以下,并避免反复冻融。

最后,若短期使用存放于4℃时,请勿超过一个月。若在实验中血清未能一次用完一瓶血清,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内(由于血清结冻时体积会增加约10%,必须预留此膨胀体积之空间,否则易发生污染或容器冻裂之情形),再放回冷冻。

4、血清中包含絮状沉淀是什么?怎么处理?

沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。融化过程产生沉淀是正常特性,不会影响产品性质。想要去除这些絮状沉淀物,有两种方法:1、可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。2、将血清小心的转移到另一个无菌瓶里,大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。

5、如何避免血清中产生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的产生:

(1)在2~8℃解冻血清时,请将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。同样原理,分装冻存的时候,须轻微的均匀摇晃,避免产生气泡,使温度与成分均一!

(2)勿直接由-20℃直接放置于37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

(3)勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。

(4)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。

(5)若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

6、培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,应该在两到三周内使用完它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

7、为什么要热灭活血清?

事实上,大部分细胞培养不需要灭火血清,仅在培养部分特殊细胞时进行灭火。如在免疫学研究,培养ES细胞、平滑肌细胞等特殊细胞时,推荐使用热灭活血清。因为加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。

8、有必要做热灭活吗?

在大多数情况下不需要热灭活处理,不但节省时间,更确保血清的质量!因为经过热处理的血清,沉淀物的行程会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察会发现有很多的“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

9、血清需要做支原体检测吗

支原体污染是世界性问题,有报道指出,支原体轻微污染即可影响200多个基因的表达,Nature杂志从2013年起,要求涉及细胞培养的研究,必须进行支原体检测。李记生物每批次血清均用拥有发明专利的支原体检测试剂进行检测,可以检出99.9%的已发现支原体种类,客户不需要另外检测,但我们仍然强烈建议培养细胞中定期进行支原体检测,以排除实验操作中人为带入支原体污染。