HRM(High Resolution Melting analysis,高分辨熔解曲线)同许多荧光PCR技术一样,是利用特定dsDNA染料可以插入DNA双链小沟中(PCR产物)的特性,通过实时监测升温过程中dsDNA解链,荧光染料脱落,荧光信号减弱或消失的过程,高分辨记录熔解曲线,从而对样品进行检测。HRM技术利用dsDNA的物理性质,准确反映DNA序列碱基配对特异性与解链温度变化的情况,无需使用特异性标记探针,不受突变种类和突变位点的限制,具有高灵敏度和特异性、高通量、操作简单灵活、成本低等优点。实验室检测证明,在PCR反应前或反应后加入饱和dsDNA染料,对HRM分析,效果相同。在PCR后加入,可闭管进行HRM分析,无需凝胶电泳。HRM分析,不损伤PCR产物,用于HRM分析的PCR产物仍可用于电泳、胶回收、测序等一系列后续操作。HRM可应用于核酸突变扫描、基因分型、甲基化检测、短串联重复序列分析、序列匹配和RNA编辑等多方面研究,已越来越受到国内外核酸分子实验室的欢迎和重视。
对于目前绝大多数的突变分析方法来说,都很难鉴定出纯合子序列突变。在一些不同种类的小的扩增片段中,高分辨率熔解曲线则显示出了鉴定纯合子序列突变的能力,这种方法能鉴定出大多数的纯合突变。HRM技术在遗传学研究方面也带来很大便利,只需在PCR反应体系中加入双链DNA饱和荧光染料,在PCR反应之后再花15 分钟,就可以完成96或384个样品的DNA变异扫描。采用这种方法,当片段的大小在400bp或者更小时,灵敏性最高。