Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜（formazan，参考图1)。WST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

图1：WST-8分子结构及检测原理

运输与保存方法:

冰袋运输。CCK-8在4℃可保存一年，在-20℃可以存放数年，反复冻融会造成测定背景O.D值升高，如经常使用，建议存放于4℃即可。

操作方法:

1. 在96孔板中配制100 μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时 (在37℃，5% CO2的条件下)。

2. 向培养板加入10 μl不同浓度的待测物质。如果测定细胞活性，则不需要2-3步骤，直接从第四步操作。

3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,  12, 24或48小时)。

4. 向每孔加入10 μl CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。

5. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

注意事项:

1）CCK-8试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化反应，如果待检测体系中有较多还原剂（或抗氧化剂）会造成背景O.D值升高，干扰检测结果。如果实验中有还原剂，请检查背景的O.D值，即测定、比较空白培养基加入药物与不加药物的培养基（含细胞）在加入CCK- 8试剂后的O.D值，如果空白O.D值明显偏高，则说明有反应，应设法去除或折算干扰因素。

2）如果细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化，应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8检测。细胞培养基酚红不影响测定结果。

3）为使CCK-8试剂盒培养基充分混匀，减少CCK-8在移液器上的残留，建议加样前用培养基稀释CCK-8试剂，混匀后加样。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 CCK-8与同类试剂比较