LcGreen（20×水溶液）

产品货号：

AN19L122

产品规格：

1mL

产品价格：

700

说明书下载

产品描述

LcGreen（20×水溶液）是一种用于实时定量PCR（qPCR）的DNA 结合染料。本产品的诸多优点使它远胜于SYBR Green I，除了有相似的光谱特性，还有三个主要特点使它区别于SYBR Green I 。

首先，LcGreen对PCR的抑制性远小于SYBR Green I。因此，使用LcGreen进行的qPCR实验可以使用快速PCR步骤。同时，本产品在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于SYBR Green I扩增信号。较高浓度也消除了“染料重分布”的缺陷，使本产品既可用于多重PCR，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲线分析（HRM）。该分析正被越来越多的用于PCR后的基因分型和异源双链分析。由于SYBR Green I对PCR的抑制性，从而要求其使用浓度必须很低，因此SYBR Green I无法解决由低浓度造成的染料重分布问题，既不能用于多重PCR也不能用于HRM。同时，染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性，因为低熔点的DNA链可能由于这种原因而无法检测到。

第二，本产品的稳定性极强。在正常的储存、操作和PCR过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里，也可以反复冻融。与之相反，SYBR Green I不稳定而且降解后对PCR抑制性更强。

第三，本产品降低了细胞膜透性，因而比SYBR Green 1更加安全。独立实验室的测试结果显示，本产品既没有诱变性也没有细胞毒性。相反，虽然SYBR Green I本身诱变性很弱，但它在细胞中可能抑制了正常DNA的修复机制，使其有诱变增强作用。考虑到PCR的广泛使用，其安全性应该足够重视。

订购信息

产品名称	货号	规格	价格
LcGreen（20×水溶液）	AN19L122	1 mL	700
LcGreen（20×水溶液）	AN19L123	5 mL	2800

产品参数

λabs/λem = 500/530 nm (结合DNA)

λabs = 471 nm (未结合DNA)

运输与保存

蓝冰运输。-20℃避光保存，有效期60个月。【注】：短期使用请避光保存于4℃。

使用方法

如下建立实验体系（仅供参考）：

名称	体积
10×的无Mg^2＋聚合酶缓冲液	5 µL
50 mM MgCl₂	2.5 µL
2 mM dNTP	5 µL
20×LcGreen	2.5 µL
Taq DNA polymerase	1-5 units
F, R Primers	各0.1-0.5 µM
模板	适量
dH₂O	to a final volume of 50 µL

实验目的

　　实时定量PCR检测20× LcGreen

主要试剂

（1）Prime

hβ-actin：

forward 5’ -CACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3’

reverse 5’-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3’

（2）HS Taq DNA Polymerase: Thermo(EP0612)

（3）Glycerlo: Sigma(V900090-500 mL)

（4）BSA: Sigma(A7030)

（5）10 mM dNTPs: Takara(4019)

实验方案

1.配制2× LcGreen Buffer

2× LcGreen Buffer
组分	浓度	体积（μL）
1 M Tris HCl pH8.5	50 mM	5
500 mM (NH4)₂SO₄	20 mM	4
50 mM MgCl₂	7 mM	14
50% glycerol	2.5%	5
DMSO	10 %	10
20× LcGreen	2×	10
10 mM dNTPs	0.4 mM	4
2 % Tween20	0.03 %	1.5
1 mg/mL BSA	22 mg/mL	2.2
H₂O	/	44.3
Total volume	/	100

2.配制 q-PCR反应体系

成分	20 μL/体系/管反应
10 μM primers	1 μL
模板	适量
HS Taq DNA 酶（5 U/μL）	0.2 μL
2× LcGreen buffer	10 μL
H₂O	定容至20 μL

【注】：① DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下，因不同种类的 DNA模板中含有的靶基因的拷贝数不同，必要时可进行梯度稀释，确定合适的 DNA 模板添加量。cDNA作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的 10%。② 引物终浓度一般控制在0.1-0.5 μM范围内。

3.实验分组：标准对照样品孔（阳性对照）、检测样品孔、空白对照孔（阴性对照）共三组，同时进行检测，分别进行三次平行实验。

4.混匀离心、上机进行荧光定量PCR（仪器为Roche：LC96）。
PCR程序：

	温度	时间
Step 1	95 ℃	2 min
Step 2	95 ℃	5 sec
Step 3	60 ℃	30 sec
Step 2~3，重复 45个循环
熔解曲线Tm值 57 ℃~99 ℃

5.保存数据，判断样本质量：

（1）检测样品与标准品之间的Ct值差

（2）检测样品与标准品之间的荧光强度差

检测结果需达到：以上两组检测指标无显著性差异

注意事项

本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。