Annexin V-647/PI 细胞凋亡检测试剂盒

产品货号:

AC12L042/AC12L043

产品规格:

50T/100T

产品价格:

1580/2480

产品描述

Annexin V-647/PI 细胞凋亡检测试剂盒提供了一种快速简便的方法,通过标记早期凋亡细胞(远红)和坏死细胞(红色),用于检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。

Annexin V-647可以标记凋亡细胞。Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称 PS)。在细胞发生早期凋亡时,PS 会外翻到细胞表面,即细胞膜外侧。用远红色荧光探针647 标记的 Annexin V,即 Annexin V-647,可以结合外翻的磷酯酰丝氨酸,从而检测细胞凋亡的重要特征。李记生物的647染料与普通荧光素相比,荧光亮度更高,且不受环境中 pH 的影响,具有良好的光稳定性。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种 DNA 结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI 可以由 488,532 或 546 nm 的激光激发,呈现红色荧光。

光谱特性

Annexin V-647: Abs/Em = 650/665 nm

PI: Abs/Em = 535/617 nm (with DNA)

订购信息

产品名称 货号 规格 价格
Annexin V-647/PI 细胞凋亡检测试剂盒 AC12L042 50 T 1580
Annexin V-647/PI 细胞凋亡检测试剂盒 AC12L043 100 T 2480

 

产品组分

产品编号 产品组成 包装规格
AC12L042 1×Annexin V 结合缓冲液 50 mL
Annexin V-647 250 μL
PI 500 μL
AC12L043 1×Annexin V 结合缓冲液 50 mL×2
Annexin V-647 500 μL
PI 1 mL

 

运输与保存

蓝冰运输。4℃避光保存,有效期24个月。

使用方法

下列实验方案以利用星形孢菌素诱导Jurkat细胞凋亡为例,如果使用其他诱导剂和其他类型的细胞,实验条件需要略作调整。

1.流式细胞检测

(1)根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品,作为阴性对照。此外,设定一组样品做单染,用于调节补偿。

(2)收集细胞。悬浮细胞:300 g,4℃离心5 min收集细胞;贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后300 g,4℃离心5 min收集细胞,胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。

【注】:用胰蛋白酶消化然后使细胞在最佳细胞培养条件和培养基中恢复约30分钟,然后再染色。胰蛋白酶消化会暂时破坏质膜,允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细胞膜的细胞质表面上,从而导致假阳性染色。

(3)用预冷的PBS洗涤细胞两次,每次均在300 g,4℃下离心5 min,收集1-5×105个细胞并用100μL 1×结合缓冲液重悬细胞。

(4)每管加入 4-5μL的Annexin V-647和5μL的PI工作液。

【注】:我们推荐准备两管额外的流式管,每管中只加入1种单染染料(Annexin V-647和PI各1管),用于流式的补偿调节。

(5)室温避光孵育 10-15 min,为避免影响细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作。

(6)每管加入400μL的PBS或1×结合缓冲液,尽快通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。Annexin V-647可以由647 nm激光激发,检测荧光发射光谱约在647 nm处(APC通道),PI发射光谱约在617 nm处。

2.荧光显微镜检测

对于悬浮细胞,可参照流式细胞检测的方法进行具体操作。

  • 在盖玻片或载玻片小室中接种细胞。
  • 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品,作为阴性对照。
  • 用PBS 洗涤细胞。

【注】:细胞收集后如果不用PBS清洗,可以用含血清的培养基直接替代Annexin V结合缓冲液,但是 Annexin V的使用浓度需要重新优化。

(4)每 100 μL的Annexin V结合缓冲液中加入5-25μL的Annexin V-647和 5μL的PI。

【注】:最佳使用浓度由具体实验要求确定。

(5)向培养板中加入足量的染液以覆盖全部细胞,室温避光孵育15-30 min。为避免影响细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。

(6)用 1×结合缓冲液清洗细胞。

(7)将孵育有细胞的盖玻片置于载玻片上,载玻片可提前加一滴 1×结合缓冲液;对于培养在小室内的细胞,可直接加入足量的 1×结合缓冲液覆盖细胞。

(8)使用合适的滤光片在荧光显微镜下观察细胞。Annexin V-647可用 APC 适用的滤光片,PI可用 Cy3或者Texas滤光片。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

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产品规格:

50T/100T

产品价格:

1580/2480

产品描述

Annexin V-647/PI 细胞凋亡检测试剂盒提供了一种快速简便的方法,通过标记早期凋亡细胞(远红)和坏死细胞(红色),用于检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。

Annexin V-647可以标记凋亡细胞。Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称 PS)。在细胞发生早期凋亡时,PS 会外翻到细胞表面,即细胞膜外侧。用远红色荧光探针647 标记的 Annexin V,即 Annexin V-647,可以结合外翻的磷酯酰丝氨酸,从而检测细胞凋亡的重要特征。李记生物的647染料与普通荧光素相比,荧光亮度更高,且不受环境中 pH 的影响,具有良好的光稳定性。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种 DNA 结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI 可以由 488,532 或 546 nm 的激光激发,呈现红色荧光。

光谱特性

Annexin V-647: Abs/Em = 650/665 nm

PI: Abs/Em = 535/617 nm (with DNA)

订购信息

产品名称 货号 规格 价格
Annexin V-647/PI 细胞凋亡检测试剂盒 AC12L042 50 T 1580
Annexin V-647/PI 细胞凋亡检测试剂盒 AC12L043 100 T 2480

 

产品组分

产品编号 产品组成 包装规格
AC12L042 1×Annexin V 结合缓冲液 50 mL
Annexin V-647 250 μL
PI 500 μL
AC12L043 1×Annexin V 结合缓冲液 50 mL×2
Annexin V-647 500 μL
PI 1 mL

 

运输与保存

蓝冰运输。4℃避光保存,有效期24个月。

使用方法

下列实验方案以利用星形孢菌素诱导Jurkat细胞凋亡为例,如果使用其他诱导剂和其他类型的细胞,实验条件需要略作调整。

1.流式细胞检测

(1)根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品,作为阴性对照。此外,设定一组样品做单染,用于调节补偿。

(2)收集细胞。悬浮细胞:300 g,4℃离心5 min收集细胞;贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后300 g,4℃离心5 min收集细胞,胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。

【注】:用胰蛋白酶消化然后使细胞在最佳细胞培养条件和培养基中恢复约30分钟,然后再染色。胰蛋白酶消化会暂时破坏质膜,允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细胞膜的细胞质表面上,从而导致假阳性染色。

(3)用预冷的PBS洗涤细胞两次,每次均在300 g,4℃下离心5 min,收集1-5×105个细胞并用100μL 1×结合缓冲液重悬细胞。

(4)每管加入 4-5μL的Annexin V-647和5μL的PI工作液。

【注】:我们推荐准备两管额外的流式管,每管中只加入1种单染染料(Annexin V-647和PI各1管),用于流式的补偿调节。

(5)室温避光孵育 10-15 min,为避免影响细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作。

(6)每管加入400μL的PBS或1×结合缓冲液,尽快通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。Annexin V-647可以由647 nm激光激发,检测荧光发射光谱约在647 nm处(APC通道),PI发射光谱约在617 nm处。

2.荧光显微镜检测

对于悬浮细胞,可参照流式细胞检测的方法进行具体操作。

  • 在盖玻片或载玻片小室中接种细胞。
  • 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品,作为阴性对照。
  • 用PBS 洗涤细胞。

【注】:细胞收集后如果不用PBS清洗,可以用含血清的培养基直接替代Annexin V结合缓冲液,但是 Annexin V的使用浓度需要重新优化。

(4)每 100 μL的Annexin V结合缓冲液中加入5-25μL的Annexin V-647和 5μL的PI。

【注】:最佳使用浓度由具体实验要求确定。

(5)向培养板中加入足量的染液以覆盖全部细胞,室温避光孵育15-30 min。为避免影响细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。

(6)用 1×结合缓冲液清洗细胞。

(7)将孵育有细胞的盖玻片置于载玻片上,载玻片可提前加一滴 1×结合缓冲液;对于培养在小室内的细胞,可直接加入足量的 1×结合缓冲液覆盖细胞。

(8)使用合适的滤光片在荧光显微镜下观察细胞。Annexin V-647可用 APC 适用的滤光片,PI可用 Cy3或者Texas滤光片。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

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