Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒

产品货号:

AC12L033

产品规格:

100T

产品价格:

1280

产品描述

本试剂盒为Annexin V与PI联合使用的试剂盒,用于检测细胞凋亡早期的发生,可区分凋亡早期凋亡细胞和晚期凋亡或坏死细胞。

Annexin V为胞内蛋白膜联蛋白家族成员,以钙离子依赖的方式选择性与磷脂酰丝氨酸(PS)结合。PS正常分布在细胞膜内侧。PS外翻到细胞膜外是不同类型的细胞在凋亡早期的明显特征,用带有FITC标记的Annexin V,即Annexin V-FITC,可通过流式细胞仪或荧光显微镜检测到这一重要特征。FITC呈现黄绿色荧光。

PI(Propidium Iodide, 碘化丙啶)是一种可对 DNA 染色的细胞核染色试剂,在嵌入DNA 后释放红色荧光。PI不能穿透完整的细胞膜,但可以穿透坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞。

Annexin V-FITC与PI联合使用时,PI 被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被 FITC 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。

FITC最大吸收波长和激发波长分别为494nm和518 nm,PI-DNA复合物的最大吸收和发射波长分别为535 nm和617 nm。

订购信息

产品名称 货号 规格 价格
Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 AC12L033 100T 1280

产品组分

产品组成 AC12L033
Annexin V-FITC 500 μL
Propidium iodide 1 mL
Binding Buffer(1×) 50 mL*2

运输与保存

蓝冰运输。4℃避光保存,有效期24个月。】:不可冷冻。

使用方法

下列实验方案以利用星形孢菌素诱导 Jurkat 细胞凋亡为例,如果使用其他诱导剂和其他类型的细胞,实验条件需要略作调整。

1.流式细胞检测

(1)根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品,作为阴性对照。此外,建议设定一组样品做单染,用于调节补偿。

(2)收集细胞。

悬浮细胞:300 g,4℃离心 5 min 收集细胞;

贴壁细胞:用不含 EDTA 的胰酶消化后 300 g,4℃离心 5 min收集细胞,胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。

】:用胰蛋白酶消化然后使细胞在最佳细胞培养条件和培养基中恢复约30 min,然后再染色。 胰蛋白酶消化会暂时破坏质膜,允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细胞膜的细胞质表面上,从而导致假阳性染色。

(3)用预冷的PBS 洗涤细胞两次,每次均在 300 g,4℃下离心 5 min,收集 1-5×105 个细胞并用100 μL 1×结合缓冲液重悬细胞。

(4)每管加入 4-5 μL 的 FITC-Annexin V 和 5 μL 的 PI工作液。

】:我们推荐准备两管额外的流式管,每管只加入一种单染染料(FITC-Annexin V 和PI),用于流式单染的补偿调节。

(5)室温避光孵育 10-15 min,为避免细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作。

(6)每管加入 400 μL 的 PBS 或 1×结合缓冲液,尽快通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。FITC-Annexin V 可以由 488nm 激光激发,检测荧光发射光谱约在 530 nm 处(FITC 通道),PI 通道发射光谱约在 617 nm 处。

】:PBS 或 1×结合缓冲液的选择根据不同凋亡处理以及不同细胞具体选择。

2.荧光显微镜检测

对于悬浮细胞,可参照流式细胞检测的方法进行具体操作。

(1)在盖玻片或载玻片小室中接种细胞。

(2)根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品,作为阴性对照。

(3)用 PBS 洗涤细胞。

】:细胞收集后如果不用 PBS 清洗,可以用含血清的培养基直接替代Annexin V 结合缓冲液,但是 Annexin V 的使用浓度需要重新优化。

(4)每 100 μL 的 Annexin V 结合缓冲液中加入 5-25 μL 的 FITC-Annexin V 和 5 μL 的 PI。

】:最佳使用浓度由具体实验要求确定。

(5)向培养板中加入足量的染液以覆盖全部细胞,室温避光孵育 15-30 min。为避免细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至 30 min。

(6)用 1×结合缓冲液清洗细胞。

(7)将孵育有细胞的盖玻片置于载玻片上,载玻片可提前加一滴 1×结合缓冲液;对于培养在小室内的细胞,可直接加入足量的 1×结合缓冲液覆盖细胞。

(8)使用合适的滤光片在荧光显微镜下观察细胞。FITC-Annexin V 可用 FITC 适用的滤光片,PI 可用 Cy3 或者 Texas。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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产品规格:

100T

产品价格:

1280

产品描述

本试剂盒为Annexin V与PI联合使用的试剂盒,用于检测细胞凋亡早期的发生,可区分凋亡早期凋亡细胞和晚期凋亡或坏死细胞。

Annexin V为胞内蛋白膜联蛋白家族成员,以钙离子依赖的方式选择性与磷脂酰丝氨酸(PS)结合。PS正常分布在细胞膜内侧。PS外翻到细胞膜外是不同类型的细胞在凋亡早期的明显特征,用带有FITC标记的Annexin V,即Annexin V-FITC,可通过流式细胞仪或荧光显微镜检测到这一重要特征。FITC呈现黄绿色荧光。

PI(Propidium Iodide, 碘化丙啶)是一种可对 DNA 染色的细胞核染色试剂,在嵌入DNA 后释放红色荧光。PI不能穿透完整的细胞膜,但可以穿透坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞。

Annexin V-FITC与PI联合使用时,PI 被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被 FITC 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。

FITC最大吸收波长和激发波长分别为494nm和518 nm,PI-DNA复合物的最大吸收和发射波长分别为535 nm和617 nm。

订购信息

产品名称 货号 规格 价格
Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 AC12L033 100T 1280

产品组分

产品组成 AC12L033
Annexin V-FITC 500 μL
Propidium iodide 1 mL
Binding Buffer(1×) 50 mL*2

运输与保存

蓝冰运输。4℃避光保存,有效期24个月。】:不可冷冻。

使用方法

下列实验方案以利用星形孢菌素诱导 Jurkat 细胞凋亡为例,如果使用其他诱导剂和其他类型的细胞,实验条件需要略作调整。

1.流式细胞检测

(1)根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品,作为阴性对照。此外,建议设定一组样品做单染,用于调节补偿。

(2)收集细胞。

悬浮细胞:300 g,4℃离心 5 min 收集细胞;

贴壁细胞:用不含 EDTA 的胰酶消化后 300 g,4℃离心 5 min收集细胞,胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。

】:用胰蛋白酶消化然后使细胞在最佳细胞培养条件和培养基中恢复约30 min,然后再染色。 胰蛋白酶消化会暂时破坏质膜,允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细胞膜的细胞质表面上,从而导致假阳性染色。

(3)用预冷的PBS 洗涤细胞两次,每次均在 300 g,4℃下离心 5 min,收集 1-5×105 个细胞并用100 μL 1×结合缓冲液重悬细胞。

(4)每管加入 4-5 μL 的 FITC-Annexin V 和 5 μL 的 PI工作液。

】:我们推荐准备两管额外的流式管,每管只加入一种单染染料(FITC-Annexin V 和PI),用于流式单染的补偿调节。

(5)室温避光孵育 10-15 min,为避免细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作。

(6)每管加入 400 μL 的 PBS 或 1×结合缓冲液,尽快通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。FITC-Annexin V 可以由 488nm 激光激发,检测荧光发射光谱约在 530 nm 处(FITC 通道),PI 通道发射光谱约在 617 nm 处。

】:PBS 或 1×结合缓冲液的选择根据不同凋亡处理以及不同细胞具体选择。

2.荧光显微镜检测

对于悬浮细胞,可参照流式细胞检测的方法进行具体操作。

(1)在盖玻片或载玻片小室中接种细胞。

(2)根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品,作为阴性对照。

(3)用 PBS 洗涤细胞。

】:细胞收集后如果不用 PBS 清洗,可以用含血清的培养基直接替代Annexin V 结合缓冲液,但是 Annexin V 的使用浓度需要重新优化。

(4)每 100 μL 的 Annexin V 结合缓冲液中加入 5-25 μL 的 FITC-Annexin V 和 5 μL 的 PI。

】:最佳使用浓度由具体实验要求确定。

(5)向培养板中加入足量的染液以覆盖全部细胞,室温避光孵育 15-30 min。为避免细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至 30 min。

(6)用 1×结合缓冲液清洗细胞。

(7)将孵育有细胞的盖玻片置于载玻片上,载玻片可提前加一滴 1×结合缓冲液;对于培养在小室内的细胞,可直接加入足量的 1×结合缓冲液覆盖细胞。

(8)使用合适的滤光片在荧光显微镜下观察细胞。FITC-Annexin V 可用 FITC 适用的滤光片,PI 可用 Cy3 或者 Texas。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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