Caspase 1活细胞凋亡检测试剂盒(绿色)

产品货号:

AC12L062

产品规格:

25T

产品价格:

4480

产品描述

活细胞凋亡检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光抑制剂。这些抑制剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞,半胱天冬酶抑制剂与活性半胱天冬酶共价结合。 Caspase-1主要参与促炎细胞因子的激活和细胞凋亡过程。已经证明胱天蛋白酶1对肽序列Tyr-Val-Ala-Asp(YVAD)具有底物选择性。该试剂盒使用FAM-YVAD-FMK作为半胱天冬酶1活性的荧光指示剂。 FAM-YVAD-FMK在凋亡细胞中不可逆地结合活化的半胱天冬酶1。一旦与半胱天冬酶1结合,荧光试剂保留在细胞内。结合抑制胱天蛋白酶1但不会阻止细胞凋亡的进行,有多种参数可用于监测细胞凋亡。

产品优势

本试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 1活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1活性,或用于筛选半胱天冬酶1抑制剂。绿色标记试剂FAM-YVAD-FMK允许通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1。本试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。

技术资料

1.Ex(nm):493

2.Em(nm):517

订购信息

产品名称

货号

规格

价格

Caspase 1活细胞凋亡检测试剂盒(绿色)

AC12L062

25 T

4480

产品组分

组分

规格

A: FAM-YVAD-FMK

1 vial

B: Washing Buffer  

100 mL

C: 500X Propidium Iodide

100 µL

D: 500X Hoechst Stain

100 µL

运输与保存

蓝冰运输。-20℃保存,有效期12个月。

实验方案

1.用密度为5×105到2×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞。

2.将FAM-YVAD-FMK以1:150的比例加入到细胞溶液中。

3在室温下孵育1 h。

4.将细胞沉淀,用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞。

5.在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞。

注】:使用前将所有部件在室温下解冻。

使用方法

1.根据您的特异性诱导方案,将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度,但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时,对于每种标记条件,以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子:

(1)用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3 h。

(2)用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3 h。

(3)用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4 h。

(4)用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4 h。

注】:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.通过向FAM-YVAD-FMK(组分A)的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。

3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液(来自步骤1)以1:150的比例添加到细胞溶液中,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育1 h。

注1】:对于FAM-YVAD-FMK标记,细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在 -20℃。

注2】:对于粘附细胞,用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3】:适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

4.将细胞以约200g旋转5 min,并用1mL洗涤缓冲液(组分B)洗涤细胞2次。将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1】:FAM-YVAD-FMK是荧光的,因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。

注2】:对于分离的细胞,应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样,用于步骤6。

5.如果需要,用DNA染色标记细胞(如用于死细胞的碘化丙锭,或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst)。

6.通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度(对于碘化丙锭,Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料,Ex / Em = 350 / 461纳米)。

(1)对于流式细胞仪,使用FL1通道监测荧光强度(FL2通道用于碘化丙锭染色)。

(2)用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。

注】:如果需要平衡细胞浓度,调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失,则此调整步骤是可选的。

(3)使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞(用于碘化丙啶染色的TRITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)。

(4)使用荧光酶标仪,使用Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm处截止)底部读取模式监测荧光强度。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

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技术资料

1.Ex(nm):493

2.Em(nm):517

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规格

价格

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4480

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规格

A: FAM-YVAD-FMK

1 vial

B: Washing Buffer  

100 mL

C: 500X Propidium Iodide

100 µL

D: 500X Hoechst Stain

100 µL

运输与保存

蓝冰运输。-20℃保存,有效期12个月。

实验方案

1.用密度为5×105到2×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞。

2.将FAM-YVAD-FMK以1:150的比例加入到细胞溶液中。

3在室温下孵育1 h。

4.将细胞沉淀,用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞。

5.在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞。

注】:使用前将所有部件在室温下解冻。

使用方法

1.根据您的特异性诱导方案,将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度,但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时,对于每种标记条件,以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子:

(1)用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3 h。

(2)用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3 h。

(3)用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4 h。

(4)用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4 h。

注】:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.通过向FAM-YVAD-FMK(组分A)的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。

3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液(来自步骤1)以1:150的比例添加到细胞溶液中,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育1 h。

注1】:对于FAM-YVAD-FMK标记,细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在 -20℃。

注2】:对于粘附细胞,用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3】:适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

4.将细胞以约200g旋转5 min,并用1mL洗涤缓冲液(组分B)洗涤细胞2次。将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1】:FAM-YVAD-FMK是荧光的,因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。

注2】:对于分离的细胞,应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样,用于步骤6。

5.如果需要,用DNA染色标记细胞(如用于死细胞的碘化丙锭,或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst)。

6.通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度(对于碘化丙锭,Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料,Ex / Em = 350 / 461纳米)。

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(2)用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。

注】:如果需要平衡细胞浓度,调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失,则此调整步骤是可选的。

(3)使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞(用于碘化丙啶染色的TRITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)。

(4)使用荧光酶标仪,使用Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm处截止)底部读取模式监测荧光强度。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

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