Evagreen

产品货号:

AN19L032

产品规格:

1mL

产品价格:

580

产品描述

Evagreen是一种用于实时定量PCR(qPCR)的DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于SYBR Green I。除了有相似的光谱特性,Evagreen有三个主要特点使它区别于SYBR Green I 。

首先,Evagreen对PCR的抑制性远小于SYBR Green I。因此,使用Evagreen进行的qPCR实验可以使用快速PCR步骤。同时,Evagreen在实验中可以使用较高的浓度,从而获得远强于SYBR Green I扩增信号。较高浓度的Evagreen也消除了“染料重分布”的缺陷,使Evagreen既可用于多重PCR,也可用于高分辨率(高清晰)熔解曲线分析(HRM)。该分析正被越来越多的用于PCR后的基因分型和异源双链分析。由于SYBR Green I对PCR的抑制性,从而要求其使用浓度必须很低,因此SYBR Green I无法解决由低浓度造成的染料重分布问题,既不能用于多重PCR也不能用于HRM。同时,染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性,因为低熔点的DNA链可能由于这种原因而无法检测到。     

第二,Evagreen的稳定性极强。在正常的储存、操作和PCR过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里,也可以反复冻融。与之相反,SYBR Green I不稳定而且降解后对PCR抑制性更强。

第三,Evagreen降低了细胞膜透性,因而比SYBR Green 1更加安全。独立实验室的测试结果显示,Evagreen既没有诱变性也没有细胞毒性。相反,虽然SYBR Green I本身诱变性很弱,但它在细胞中可能抑制了正常DNA的修复机制,使其有诱变增强作用。考虑到PCR的广泛使用,其安全性应该足够重视。

订购信息

产品名称

货号

规格

价格

Evagreen

AN19L032

1 mL

580

Evagreen

AN19L033

5 mL

2280

产品参数

λabs/λem = 500/530 nm (结合DNA)

λabs = 471 nm (未结合DNA)

运输与保存

蓝冰运输。4℃短期避光保存,有效期12个月;-20℃长期避光保存,有效期24个月。

使用方法

如下建立实验体系:(仅供参考)

名 称

体 积

10× 的无Mg2+聚合酶缓冲液

5 µL

50 mM MgCl2

2.5 µL

2 mM dNTP

5 µL

20×Evagreen

2.5 µL

Taq DNA polymerase

1-5 units

F, R Primers

各0.1-0.5 µM

模板

适量

dH2O

to a final volume of 50 µL

实验目的

实时定量PCR检测20× Evagreen

主要试剂

  1. Prime

hβ-actin:

forward 5’ -CACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3’

reverse 5’-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3’

  1. HS Taq DNA Polymerase: Thermo(EP0612)
  2. Glycerlo: Sigma(V900090-500 mL)
  3. BSA: Sigma(A7030)
  4. 10 mM dNTPs: Takara(4019)

实验方案

  1. 配制2× EvagreenBuffer

2× Evagreen Buffer

组分

浓度

体积(μL)

1 M Tris HCl pH8.5

50 mM

5

500 mM (NH4)2SO4

20 mM

4

50 mM MgCl2

7 mM

14

50% glycerol

2.5%

5

DMSO

10 %

10

20× Evagreen

10

10 mM dNTPs

0.4 mM

4

2 % Tween20

0.03 %

1.5

1 mg/mL BSA

22 mg/mL

2.2

H2O

/

44.3

Total volume

/

100

  1. 配制 q-PCR反应体系

成分

20 μL/体系/管反应

10 μM primers

1 μL

模板

适量

HS Taq DNA 酶 (5 U/μL)

0.2 μL

2× Evagreen buffer

10 μL

H2O

定容至20 μL

注】:① DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同种类的 DNA模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯度稀释,确定合适的 DNA 模板添加量。cDNA作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的 10%。②引物终浓度一般控制在0.1-0.5 μM范围内。

  1. 实验分组:标准对照样品孔(阳性对照)、检测样品孔、空白对照孔(阴性对照)共三组,同时进行检测,分别进行三次平行实验。
  2. 混匀离心、上机进行荧光定量PCR(仪器为Roche:LC96)。

PCR程序:

 

温度

时间

Step 1

95 ℃

2 min

Step 2

95 ℃

5 sec

Step 3

60 ℃

30 sec

Step 2~3,重复 45个循环

熔解曲线Tm值 57 ℃~99 ℃

  1. 保存数据,判断样本质量:

A.检测样品与标准品之间的Ct值差

B.检测样品与标准品之间的荧光强度差

检测结果需达到:以上两组检测指标无显著性差异

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

相关产品推荐

EZ PCR直扩鼠尾裂解液(货号:AN11L227)

PikoGreen dsDNA定量试剂盒(超敏)(货号:AN54L038)

相关产品
LcGreen(20×水溶液)
TRNzol
123

公司:新疆代理

公司:新疆代理

公司:新疆代理

Evagreen

产品货号:

AN19L032

产品规格:

1mL

产品价格:

580

产品描述

Evagreen是一种用于实时定量PCR(qPCR)的DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于SYBR Green I。除了有相似的光谱特性,Evagreen有三个主要特点使它区别于SYBR Green I 。

首先,Evagreen对PCR的抑制性远小于SYBR Green I。因此,使用Evagreen进行的qPCR实验可以使用快速PCR步骤。同时,Evagreen在实验中可以使用较高的浓度,从而获得远强于SYBR Green I扩增信号。较高浓度的Evagreen也消除了“染料重分布”的缺陷,使Evagreen既可用于多重PCR,也可用于高分辨率(高清晰)熔解曲线分析(HRM)。该分析正被越来越多的用于PCR后的基因分型和异源双链分析。由于SYBR Green I对PCR的抑制性,从而要求其使用浓度必须很低,因此SYBR Green I无法解决由低浓度造成的染料重分布问题,既不能用于多重PCR也不能用于HRM。同时,染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性,因为低熔点的DNA链可能由于这种原因而无法检测到。     

第二,Evagreen的稳定性极强。在正常的储存、操作和PCR过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里,也可以反复冻融。与之相反,SYBR Green I不稳定而且降解后对PCR抑制性更强。

第三,Evagreen降低了细胞膜透性,因而比SYBR Green 1更加安全。独立实验室的测试结果显示,Evagreen既没有诱变性也没有细胞毒性。相反,虽然SYBR Green I本身诱变性很弱,但它在细胞中可能抑制了正常DNA的修复机制,使其有诱变增强作用。考虑到PCR的广泛使用,其安全性应该足够重视。

订购信息

产品名称

货号

规格

价格

Evagreen

AN19L032

1 mL

580

Evagreen

AN19L033

5 mL

2280

产品参数

λabs/λem = 500/530 nm (结合DNA)

λabs = 471 nm (未结合DNA)

运输与保存

蓝冰运输。4℃短期避光保存,有效期12个月;-20℃长期避光保存,有效期24个月。

使用方法

如下建立实验体系:(仅供参考)

名 称

体 积

10× 的无Mg2+聚合酶缓冲液

5 µL

50 mM MgCl2

2.5 µL

2 mM dNTP

5 µL

20×Evagreen

2.5 µL

Taq DNA polymerase

1-5 units

F, R Primers

各0.1-0.5 µM

模板

适量

dH2O

to a final volume of 50 µL

实验目的

实时定量PCR检测20× Evagreen

主要试剂

  1. Prime

hβ-actin:

forward 5’ -CACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3’

reverse 5’-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3’

  1. HS Taq DNA Polymerase: Thermo(EP0612)
  2. Glycerlo: Sigma(V900090-500 mL)
  3. BSA: Sigma(A7030)
  4. 10 mM dNTPs: Takara(4019)

实验方案

  1. 配制2× EvagreenBuffer

2× Evagreen Buffer

组分

浓度

体积(μL)

1 M Tris HCl pH8.5

50 mM

5

500 mM (NH4)2SO4

20 mM

4

50 mM MgCl2

7 mM

14

50% glycerol

2.5%

5

DMSO

10 %

10

20× Evagreen

10

10 mM dNTPs

0.4 mM

4

2 % Tween20

0.03 %

1.5

1 mg/mL BSA

22 mg/mL

2.2

H2O

/

44.3

Total volume

/

100

  1. 配制 q-PCR反应体系

成分

20 μL/体系/管反应

10 μM primers

1 μL

模板

适量

HS Taq DNA 酶 (5 U/μL)

0.2 μL

2× Evagreen buffer

10 μL

H2O

定容至20 μL

注】:① DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同种类的 DNA模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯度稀释,确定合适的 DNA 模板添加量。cDNA作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的 10%。②引物终浓度一般控制在0.1-0.5 μM范围内。

  1. 实验分组:标准对照样品孔(阳性对照)、检测样品孔、空白对照孔(阴性对照)共三组,同时进行检测,分别进行三次平行实验。
  2. 混匀离心、上机进行荧光定量PCR(仪器为Roche:LC96)。

PCR程序:

 

温度

时间

Step 1

95 ℃

2 min

Step 2

95 ℃

5 sec

Step 3

60 ℃

30 sec

Step 2~3,重复 45个循环

熔解曲线Tm值 57 ℃~99 ℃

  1. 保存数据,判断样本质量:

A.检测样品与标准品之间的Ct值差

B.检测样品与标准品之间的荧光强度差

检测结果需达到:以上两组检测指标无显著性差异

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

相关产品推荐

EZ PCR直扩鼠尾裂解液(货号:AN11L227)

PikoGreen dsDNA定量试剂盒(超敏)(货号:AN54L038)

相关产品
LcGreen(20×水溶液)
TRNzol