EZ ECL pico化学发光液(超敏型)

产品货号:

AP34L024/AP34L025

产品规格:

100mL/500mL

产品价格:

500/2000

产品描述

EZ ECL Pico化学发光液是一款增强型化学发光(ECL)HRP底物,为使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联物的免疫印迹实验提供了明亮的信号、低至皮克级检测灵敏度。该ECL底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液,以出色性能、通用性和高性价比,满足用户的免疫印迹应用需求。可帮助用户在免疫印迹分析过程中实现皮克级的蛋白检测(<1×109g),极其节省抗体。本产品一抗浓度范围0.2~1 μg/mL(以1 mg/mL储存液稀释1:1,000至1:5,000倍);二抗浓度10-50ng/ml(以1 mg/mL储存液稀释1:20,000至1:100,000倍)。

EZ Pico底物的特点:

  • 灵敏度高:检测硝化纤维素膜或PVDF膜上皮克级的蛋白条带。
  • 信号持续时间长:在条件优化情况下,经底物孵育的印迹条带能够持续输出6~8h的可检测光信号。
  • 试剂稳定:工作液在24h内保持稳定,试剂盒在室温下可稳定放置长达12个月。

订购信息

产品名称

货号

规格

价格

EZ ECL pico化学发光液(超敏型)

AP34L024

100 mL 

500

EZ ECL pico化学发光液(超敏型)

AP34L025

500 mL

2000

产品组分

组分名称

A液

B液

AP34L024(100 mL)

50 mL

50 mL

AP34L025(500 mL)

250 mL

250 mL

运输与保存

蓝冰运输。4℃避光保存,有效期12个月。

使用方法

  1. 按常规方法执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。

【注】优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度,以保证阳性结果。将一抗浓度稀释到0.2~1 μg/mL,将二抗浓度稀释到10~50 ng/mL(最佳稀释度取决于一抗和膜上的抗原量)。

  1. 新鲜配制发光工作液:根据用量将两种组份按1:1比例混合均匀,备用。

【注】①短时间暴露于日光灯下不会损害该工作液,但为获得最佳结果,将此工作液保存在棕色瓶中,避免暴露于任何强光。②取A液和B液一定要用不同的枪头,工作液现配现用,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

  1. 用平头镊取出膜,搭在滤纸上沥干洗液,勿使膜完全干燥。用移液器将工作液加到膜上(推荐100μL发光液/cm2膜),使之充分接触。室温孵育5 min,准备立即压片曝光。
  2. 用平头镊子夹起膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,去除膜上多余的液体,留下少量工作液,不可让膜完全干燥。
  3. 在X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹印迹膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。
  4. 将X光胶片置于膜的上面。建议第一次曝光60s。之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前5~30min期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时,但强度会随时间下降,如底物孵育较长时间后曝光,曝光时间可能需要延长以获得较强信号。如果使用磷光存储成像设备(如Bio-Rad的分子成像仪系统)或CCD照相机可能需要较长的曝光时间。

【注】胶片与膜之间的任何相对移动,可能在胶片上造成人为的非特异信号。

  1. 使用合适的显影剂和定影剂对胶片进行显影。如果信号太强,则缩短曝光时间或将印记膜进行剥离并降低抗体浓度重新检测。

检测系统有效性(如需要):在暗室中,在一个清洁试管中加入将1~2 mL底物工作液。关闭灯,添加1 μL未稀释的HRP标记二抗工作液。该溶液应当立即发出蓝色光,蓝光信号在随后的几分钟渐淡。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 步骤1~5可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印。
  3. 长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
  4. 发光工作液孵育约3min后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10 h。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。
  5. 由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000~1:4000,二抗1:2000~1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。
  6. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。
  7. 使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
  8. NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。

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产品规格:

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产品价格:

500/2000

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EZ ECL Pico化学发光液是一款增强型化学发光(ECL)HRP底物,为使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联物的免疫印迹实验提供了明亮的信号、低至皮克级检测灵敏度。该ECL底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液,以出色性能、通用性和高性价比,满足用户的免疫印迹应用需求。可帮助用户在免疫印迹分析过程中实现皮克级的蛋白检测(<1×109g),极其节省抗体。本产品一抗浓度范围0.2~1 μg/mL(以1 mg/mL储存液稀释1:1,000至1:5,000倍);二抗浓度10-50ng/ml(以1 mg/mL储存液稀释1:20,000至1:100,000倍)。

EZ Pico底物的特点:

  • 灵敏度高:检测硝化纤维素膜或PVDF膜上皮克级的蛋白条带。
  • 信号持续时间长:在条件优化情况下,经底物孵育的印迹条带能够持续输出6~8h的可检测光信号。
  • 试剂稳定:工作液在24h内保持稳定,试剂盒在室温下可稳定放置长达12个月。

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AP34L024

100 mL 

500

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AP34L025

500 mL

2000

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组分名称

A液

B液

AP34L024(100 mL)

50 mL

50 mL

AP34L025(500 mL)

250 mL

250 mL

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蓝冰运输。4℃避光保存,有效期12个月。

使用方法

  1. 按常规方法执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。

【注】优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度,以保证阳性结果。将一抗浓度稀释到0.2~1 μg/mL,将二抗浓度稀释到10~50 ng/mL(最佳稀释度取决于一抗和膜上的抗原量)。

  1. 新鲜配制发光工作液:根据用量将两种组份按1:1比例混合均匀,备用。

【注】①短时间暴露于日光灯下不会损害该工作液,但为获得最佳结果,将此工作液保存在棕色瓶中,避免暴露于任何强光。②取A液和B液一定要用不同的枪头,工作液现配现用,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

  1. 用平头镊取出膜,搭在滤纸上沥干洗液,勿使膜完全干燥。用移液器将工作液加到膜上(推荐100μL发光液/cm2膜),使之充分接触。室温孵育5 min,准备立即压片曝光。
  2. 用平头镊子夹起膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,去除膜上多余的液体,留下少量工作液,不可让膜完全干燥。
  3. 在X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹印迹膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。
  4. 将X光胶片置于膜的上面。建议第一次曝光60s。之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前5~30min期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时,但强度会随时间下降,如底物孵育较长时间后曝光,曝光时间可能需要延长以获得较强信号。如果使用磷光存储成像设备(如Bio-Rad的分子成像仪系统)或CCD照相机可能需要较长的曝光时间。

【注】胶片与膜之间的任何相对移动,可能在胶片上造成人为的非特异信号。

  1. 使用合适的显影剂和定影剂对胶片进行显影。如果信号太强,则缩短曝光时间或将印记膜进行剥离并降低抗体浓度重新检测。

检测系统有效性(如需要):在暗室中,在一个清洁试管中加入将1~2 mL底物工作液。关闭灯,添加1 μL未稀释的HRP标记二抗工作液。该溶液应当立即发出蓝色光,蓝光信号在随后的几分钟渐淡。

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  3. 长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
  4. 发光工作液孵育约3min后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10 h。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。
  5. 由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000~1:4000,二抗1:2000~1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。
  6. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。
  7. 使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
  8. NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。

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