产品描述

EZ ECL Pico化学发光液是一款增强型化学发光(ECL)HRP底物，为使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联物的免疫印迹实验提供了明亮的信号、低至皮克级检测灵敏度。该ECL底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液，以出色性能、通用性和高性价比，满足用户的免疫印迹应用需求。可帮助用户在免疫印迹分析过程中实现皮克级的蛋白检测(<1×10^–9g)，极其节省抗体。本产品一抗浓度范围0.2~1 μg/mL（以1 mg/mL储存液稀释1:1,000至1:5,000倍）；二抗浓度10-50ng/ml（以1 mg/mL储存液稀释1:20,000至1:100,000倍）。

EZ Pico底物的特点：

• 灵敏度高：检测硝化纤维素膜或PVDF膜上皮克级的蛋白条带。
• 信号持续时间长：在条件优化情况下，经底物孵育的印迹条带能够持续输出6~8h的可检测光信号。
• 试剂稳定：工作液在24h内保持稳定，试剂盒在室温下可稳定放置长达12个月。

订购信息

产品组分

运输与保存

蓝冰运输。4℃避光保存，有效期12个月。

使用方法

1. 按常规方法执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。

【注】：优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度，以保证阳性结果。将一抗浓度稀释到0.2～1 μg/mL，将二抗浓度稀释到10～50 ng/mL（最佳稀释度取决于一抗和膜上的抗原量）。

2. 新鲜配制发光工作液：根据用量将两种组份按1:1比例混合均匀，备用。

【注】：①短时间暴露于日光灯下不会损害该工作液，但为获得最佳结果，将此工作液保存在棕色瓶中，避免暴露于任何强光。②取A液和B液一定要用不同的枪头，工作液现配现用，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

3. 用平头镊取出膜，搭在滤纸上沥干洗液，勿使膜完全干燥。用移液器将工作液加到膜上（推荐100μL发光液/cm²膜），使之充分接触。室温孵育5 min，准备立即压片曝光。
4. 用平头镊子夹起膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体，留下少量工作液，不可让膜完全干燥。
5. 在X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹印迹膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。
6. 将X光胶片置于膜的上面。建议第一次曝光60s。之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前5~30min期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时，但强度会随时间下降，如底物孵育较长时间后曝光，曝光时间可能需要延长以获得较强信号。如果使用磷光存储成像设备（如Bio-Rad的分子成像仪系统）或CCD照相机可能需要较长的曝光时间。

【注】：胶片与膜之间的任何相对移动，可能在胶片上造成人为的非特异信号。

7. 使用合适的显影剂和定影剂对胶片进行显影。如果信号太强，则缩短曝光时间或将印记膜进行剥离并降低抗体浓度重新检测。

检测系统有效性（如需要）：在暗室中，在一个清洁试管中加入将1~2 mL底物工作液。关闭灯，添加1 μL未稀释的HRP标记二抗工作液。该溶液应当立即发出蓝色光，蓝光信号在随后的几分钟渐淡。

注意事项

1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 步骤1～5可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印。
3. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
4. 发光工作液孵育约3min后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因而弱带可曝光1-10 h。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。
5. 由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。
6. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。
7. 使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
8. NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过0.01%。

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