JC-1线粒体膜电位检测试剂盒

产品货号:

AC12L072/AC12L073

产品规格:

20T/50T

产品价格:

680/1350

产品描述

线粒体膜电位降低是细胞早期凋亡的一个标志,它发生在细胞膜上的磷酯酰丝氨酸外翻与caspase水解酶激活之前。当线粒体膜通透性发生改变时,膜电位会降低。这种膜电位的改变是由于 Bax二聚体的形成和 Bid, Bak, Bad的激活,从而诱导线粒体膜形成孔隙造成的。当这些促凋亡蛋白被激活时,线粒体同时也将细胞色素 C 释放到细胞质中。

JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△ Ψm的理想荧光探针,它可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时,JC-1 聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时,JC-1不能聚集在线粒体的基质中,此时 JC-1 为单体,可以产生绿色荧光。通过 JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到膜电位的下降,同时也可以用 JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。

JC-1单体的最大激发波长为 510 nm,最大发射波长为527 nm;JC-1 聚合物的最大激发波长为 585 nm,最大发射波长为 590 nm。这款试剂盒操作简单快速,可以通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪检测。

订购信息

产品名称

货号

规格

价格

JC-1线粒体膜电位检测试剂盒

AC12L072

20 T

680

JC-1线粒体膜电位检测试剂盒

AC12L073

50 T

1350

产品组分

组分

20 T

100 T

A: JC-1,100× in DMSO

100 μL

500 μL

B : 10× Assay Buffer

2 mL

10 mL

C: CCCP, 50 mM

10 μL

50 μL

运输与保存

蓝冰运输。组分A、B需避光冷藏保存于4℃,并尽量避免反复冻融;组分C需保存于-20℃。有效期见外包装。

光谱特性

Ex/Em:

510/527 nm(单体物,绿色);

585/590 nm(聚合物,红色)。

使用方法

1.试剂准备

配制 JC-1 工作液

按如下方案配置1mL 1×JC-1染色工作液:取10 µL 100×JC-1染色液,加入到890 µL灭菌的diH2O中,涡旋混匀,向上述混合液中加入100 µL 10× Assay Buffer,涡旋混匀,即可得到1×JC-1染色液。

】:

(1)配置体积可同比例扩大或缩小。

(2)不建议直接用1×Assay Buffer稀释100×JC-1染色液,可能会出现沉淀。

配制1× Assay Buffer

用 diH2O 按 10:1 稀释检测缓冲液(如1 mL 10×assay buffer + 9 mL diH2O)。

2.流式细胞染色方案

细胞染色

开始实验之前,请确保JC-1和CCCP溶液已恢复至室温。

(1)按实验所需,在培养板中接种细胞(悬浮细胞不要超过106个/mL)。

(2)阳性对照组:根据培养基的量加入相应体积50 mM的CCCP溶液(如终浓度为50 μM即1 mL培养基加入1 μL 50 mM的CCCP溶液),37℃孵育20 min。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料确定。

(3)对于贴壁细胞,染色前先进行消化处理,将其制成细胞悬液,0.5 mL装于离心管中。

(4)室温下400 x g,离心5 min。

(5)除去上清。

(6)用0.5 mL的 JC-1 工作液重悬细胞。

(7)置于37℃细胞培养箱,孵育 15 min。

(8)室温下400 x g,离心 5 min,去除上清。

(9)用 2 mL 的 PBS 缓冲液、培养基或1× Assay Buffer重悬细胞,离心去除上清,重复一次。

(10)用 0.5 mL的 PBS 、培养基或1× Assay Buffer重悬细胞,用流式细胞仪检测分析。

流式细胞仪定量分析 

对于正常细胞,在PE或PI(FL2)通道可以检测到线粒体内的JC-1红色聚集物;对于凋亡细胞,在FITC(FL1)通道可以检测到JC-1绿色单体物。

3.荧光显微镜染色方案

悬浮细胞染色

(1)参照流式细胞仪染色方案,对细胞进行染色。

(2)用0.3 mL的 PBS或培养基重悬细胞。

贴壁细胞染色

(1)在培养皿或培养板上接种细胞。

(2)阳性对照组:根据培养基的量加入相应体积50 mM的CCCP溶液(如终浓度为50 μM即1 mL培养基加入1 μL 50 mM的CCCP溶液),37℃孵育20 min。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料确定。 

(3)去除培养基,加入JC-1工作液使其覆盖细胞表面。

(4)置于37℃细胞培养箱,孵育 15 min。  

(5)除去染液,用PBS 缓冲液、培养基或1× Assay Buffer清洗一次细胞。

(6)用荧光显微镜观察分析。

荧光显微镜成像 

采用可以同时检测荧光素和罗丹明,或者荧光素与Texas Red 的双通道滤波器荧光显微镜观察细胞。对于正常细胞,拥有完整的线粒体膜电位,线粒体在590 nm处发出红色荧光,细胞质发出绿色荧光;对于凋亡或坏死的细胞,染料以单体形式存在,在530 nm处发出绿色荧光。

4.测定荧光相对比率染色方案

(1)按照实验要求在96孔板中接种细胞。

(2)阳性对照组:根据培养基的量加入相应体积50 mM的CCCP溶液(如终浓度为50 μM即1 mL培养基加入1 μL 50 mM的CCCP溶液),37℃孵育20 min。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料确定。

(3)根据荧光显微镜细胞染色方案对细胞进行染色处理。

(4)用荧光酶标仪检测荧光值(红色荧光:Ex/Em=550/600 nm;绿色荧光 Ex/Em=485/535 nm)。

(5)计算红绿荧光比值。

(6)与正常细胞相比,在凋亡或坏死细胞中,红绿荧光比值会降低。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

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产品规格:

20T/50T

产品价格:

680/1350

产品描述

线粒体膜电位降低是细胞早期凋亡的一个标志,它发生在细胞膜上的磷酯酰丝氨酸外翻与caspase水解酶激活之前。当线粒体膜通透性发生改变时,膜电位会降低。这种膜电位的改变是由于 Bax二聚体的形成和 Bid, Bak, Bad的激活,从而诱导线粒体膜形成孔隙造成的。当这些促凋亡蛋白被激活时,线粒体同时也将细胞色素 C 释放到细胞质中。

JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△ Ψm的理想荧光探针,它可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时,JC-1 聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时,JC-1不能聚集在线粒体的基质中,此时 JC-1 为单体,可以产生绿色荧光。通过 JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到膜电位的下降,同时也可以用 JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。

JC-1单体的最大激发波长为 510 nm,最大发射波长为527 nm;JC-1 聚合物的最大激发波长为 585 nm,最大发射波长为 590 nm。这款试剂盒操作简单快速,可以通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪检测。

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规格

价格

JC-1线粒体膜电位检测试剂盒

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20 T

680

JC-1线粒体膜电位检测试剂盒

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50 T

1350

产品组分

组分

20 T

100 T

A: JC-1,100× in DMSO

100 μL

500 μL

B : 10× Assay Buffer

2 mL

10 mL

C: CCCP, 50 mM

10 μL

50 μL

运输与保存

蓝冰运输。组分A、B需避光冷藏保存于4℃,并尽量避免反复冻融;组分C需保存于-20℃。有效期见外包装。

光谱特性

Ex/Em:

510/527 nm(单体物,绿色);

585/590 nm(聚合物,红色)。

使用方法

1.试剂准备

配制 JC-1 工作液

按如下方案配置1mL 1×JC-1染色工作液:取10 µL 100×JC-1染色液,加入到890 µL灭菌的diH2O中,涡旋混匀,向上述混合液中加入100 µL 10× Assay Buffer,涡旋混匀,即可得到1×JC-1染色液。

】:

(1)配置体积可同比例扩大或缩小。

(2)不建议直接用1×Assay Buffer稀释100×JC-1染色液,可能会出现沉淀。

配制1× Assay Buffer

用 diH2O 按 10:1 稀释检测缓冲液(如1 mL 10×assay buffer + 9 mL diH2O)。

2.流式细胞染色方案

细胞染色

开始实验之前,请确保JC-1和CCCP溶液已恢复至室温。

(1)按实验所需,在培养板中接种细胞(悬浮细胞不要超过106个/mL)。

(2)阳性对照组:根据培养基的量加入相应体积50 mM的CCCP溶液(如终浓度为50 μM即1 mL培养基加入1 μL 50 mM的CCCP溶液),37℃孵育20 min。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料确定。

(3)对于贴壁细胞,染色前先进行消化处理,将其制成细胞悬液,0.5 mL装于离心管中。

(4)室温下400 x g,离心5 min。

(5)除去上清。

(6)用0.5 mL的 JC-1 工作液重悬细胞。

(7)置于37℃细胞培养箱,孵育 15 min。

(8)室温下400 x g,离心 5 min,去除上清。

(9)用 2 mL 的 PBS 缓冲液、培养基或1× Assay Buffer重悬细胞,离心去除上清,重复一次。

(10)用 0.5 mL的 PBS 、培养基或1× Assay Buffer重悬细胞,用流式细胞仪检测分析。

流式细胞仪定量分析 

对于正常细胞,在PE或PI(FL2)通道可以检测到线粒体内的JC-1红色聚集物;对于凋亡细胞,在FITC(FL1)通道可以检测到JC-1绿色单体物。

3.荧光显微镜染色方案

悬浮细胞染色

(1)参照流式细胞仪染色方案,对细胞进行染色。

(2)用0.3 mL的 PBS或培养基重悬细胞。

贴壁细胞染色

(1)在培养皿或培养板上接种细胞。

(2)阳性对照组:根据培养基的量加入相应体积50 mM的CCCP溶液(如终浓度为50 μM即1 mL培养基加入1 μL 50 mM的CCCP溶液),37℃孵育20 min。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料确定。 

(3)去除培养基,加入JC-1工作液使其覆盖细胞表面。

(4)置于37℃细胞培养箱,孵育 15 min。  

(5)除去染液,用PBS 缓冲液、培养基或1× Assay Buffer清洗一次细胞。

(6)用荧光显微镜观察分析。

荧光显微镜成像 

采用可以同时检测荧光素和罗丹明,或者荧光素与Texas Red 的双通道滤波器荧光显微镜观察细胞。对于正常细胞,拥有完整的线粒体膜电位,线粒体在590 nm处发出红色荧光,细胞质发出绿色荧光;对于凋亡或坏死的细胞,染料以单体形式存在,在530 nm处发出绿色荧光。

4.测定荧光相对比率染色方案

(1)按照实验要求在96孔板中接种细胞。

(2)阳性对照组:根据培养基的量加入相应体积50 mM的CCCP溶液(如终浓度为50 μM即1 mL培养基加入1 μL 50 mM的CCCP溶液),37℃孵育20 min。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料确定。

(3)根据荧光显微镜细胞染色方案对细胞进行染色处理。

(4)用荧光酶标仪检测荧光值(红色荧光:Ex/Em=550/600 nm;绿色荧光 Ex/Em=485/535 nm)。

(5)计算红绿荧光比值。

(6)与正常细胞相比,在凋亡或坏死细胞中,红绿荧光比值会降低。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

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