NP40裂解液(带抑制剂)

产品货号:

AP01L054

产品规格:

100mL

产品价格:

218

产品描述

NP40裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液,主要成分为50 mM Tris(pH7.4),150 mM NaCl,1% NP-40以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制。对胞浆亚组分、胞核成分均有较强裂解作用,有利于胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。适用于常规的Western、IP和co-IP等实验蛋白样品的制备。

订购信息

产品名称

货号

规格

价格

NP40裂解液(带抑制剂)

AP01L054

100 mL

218

产品组分

产品货号

产品组分

产品规格

AP01L054

NP40裂解液

100 mL

磷酸酶抑制剂

2*1 mL

PMSF

1 mL

产品说明书

一份

运输与保存

蓝冰运输。裂解液4℃保存,其余-20℃保存,有效期12个月。

使用方法

  1. 对于培养细胞样品
  • 融解NP-40裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
  • 细胞裂解

对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2秒后,细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞:离心收集细胞,按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液,混匀,充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/管,然后再裂解。具体NP-40裂解液的使用量参照表1。

  • 充分裂解后,10000~14000rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
  1. 对于组织样品

(1) 把组织剪切成细小的碎片;

(2) 融解NP-40裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

(3) 按照每20 mg组织加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。

(4) 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

(5) 充分裂解后,10000~14000 rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品,含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定蛋白浓度。
  3. 通常6孔板每孔细胞加入150μL裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。
  4. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

1; NP-40裂解液的使用量

样品种类

样品来源

收获细胞数

RIPA用量

可制备样品数

细胞

6孔板

2.5*106

150-250 μL

400-600

60 mm培养板

5.2*106

300-500 μL

200-300

90 mm培养板

12.2*106

500-1000 μL

100-200

25 cm2培养瓶

5*106

300-500 μL

200-300

75 cm2培养瓶

2*107

1000-2000 μL

50-100

组织

20 mg组织块

 

150-250 μL

400-600

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AP01L054

产品规格:

100mL

产品价格:

218

产品描述

NP40裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液,主要成分为50 mM Tris(pH7.4),150 mM NaCl,1% NP-40以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制。对胞浆亚组分、胞核成分均有较强裂解作用,有利于胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。适用于常规的Western、IP和co-IP等实验蛋白样品的制备。

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NP40裂解液(带抑制剂)

AP01L054

100 mL

218

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产品货号

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产品规格

AP01L054

NP40裂解液

100 mL

磷酸酶抑制剂

2*1 mL

PMSF

1 mL

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一份

运输与保存

蓝冰运输。裂解液4℃保存,其余-20℃保存,有效期12个月。

使用方法

  1. 对于培养细胞样品
  • 融解NP-40裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
  • 细胞裂解

对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2秒后,细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞:离心收集细胞,按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液,混匀,充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/管,然后再裂解。具体NP-40裂解液的使用量参照表1。

  • 充分裂解后,10000~14000rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
  1. 对于组织样品

(1) 把组织剪切成细小的碎片;

(2) 融解NP-40裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

(3) 按照每20 mg组织加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。

(4) 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

(5) 充分裂解后,10000~14000 rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品,含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定蛋白浓度。
  3. 通常6孔板每孔细胞加入150μL裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。
  4. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

1; NP-40裂解液的使用量

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样品来源

收获细胞数

RIPA用量

可制备样品数

细胞

6孔板

2.5*106

150-250 μL

400-600

60 mm培养板

5.2*106

300-500 μL

200-300

90 mm培养板

12.2*106

500-1000 μL

100-200

25 cm2培养瓶

5*106

300-500 μL

200-300

75 cm2培养瓶

2*107

1000-2000 μL

50-100

组织

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