Pikogreen dsDNA定量试剂盒(超敏)

产品货号:

AN54L038

产品规格:

200assays

产品价格:

650

产品描述

PikoGreen dsDNA 定量试剂盒(PikoGreen HighSensitivity dsDNA Quantitation Kit)不同于常规的基于吸光度的测量,这款试剂盒可以区分dsDNA、ssDNA或RNA,有选择性地检测dsDNA(见图1)。与传统DNA定量方法相比,该产品具有检测范围广、高灵敏度、高特异性等优点。试剂盒主要包含PikoGreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Buffer, Enhancer solution以及pre-diluted dsDNA Standards三个组分,可以在200 uL体系内定量0.2~100 ng的dsDNA(见图2)。此外,试剂盒还可以将其他污染物的影响降低至最低,可以耐受常规污染物例如蛋白质,盐,有机溶剂和洗涤剂等(见表1),本试剂盒不具有细胞膜通透性,没有细胞毒性和诱发突变性,对人体安全无害。

订购信息

产品名称

货号

规格

价格

PikoGreen dsDNA定量试剂盒(超敏)

AN54L038

200 assays

650

PikoGreen dsDNA定量试剂盒(超敏)

AN54L039

1000 assays

2650

产品组分

组分

AN54L038

AN54L039

A: PikoGreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Solution

50 mL

250 mL

B: PikoGreen High Sensitivity dsDNA Enhancer, 100×

0.5 mL

2.5 mL

C: dsDNA Standards 0 , 0.5, 1, 2 ,4 ,6, 8 and 10 ng/uL dsDNA from calf thymus

每组 0.1 mL(8组)

每组 0.5 mL(8组)

运输与保存

蓝冰运输。4℃避光保存,有效期24个月。

使用方法

  1. 使用前,将产品从储存条件下取出恢复至室温。如果100XEnchancer储存液出现沉淀,可37℃水浴溶解。每个组分应充分震荡或涡旋混匀、离心,以免造成不必要的试剂损耗。
  2. 每个待测样品对应200μL的PikoGreen工作液。对于一个96孔板,吸取200μL 100X Enchancer,加入到20 mL Quantitation Solution 中,涡旋混匀,配置成PikoGreen工作液,为得到最佳结果,工作液应在1 h内使用完毕。如果将工作液重新储存并在24 h内使用,结果的准确性会有轻微损失。储存过程中,增强液可能会出现沉淀现象,可以通过涡旋震荡使其重悬。
  3. 对于每个样品,吸取200μL的工作液至黑色的96孔板微孔中。为确保结果精确可靠,建议每个测试样品和DNA标样分别做平行的3个复孔,此过程也可以使用有精确量程的移液排枪进行。黑色的检测板可以减少各测试样品间的荧光干扰。
  4. 在96孔板微孔中,每孔加入10μL的dsDNA标样或未知样品,并用移液器轻轻混匀。
  5. 将微孔板室温避光孵育5~10min,为得到最佳结果,孵育结束后,应立即读取检测板。也可以在6h内读取数据,但结果的精确性会有轻微损失。
  6. 使用激发波长和发射波长在485nm和530nm处的酶标仪测量荧光值。
  7. 制作一条标准曲线,计算检测样品的DNA浓度(见图2)。

】:图2标准曲线仅供参考,您可以根据实际测得的数据自制标准曲线,从而求算样品的浓度。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 对于要检测的植物或动物来源的DNA样本,小牛胸腺DNA(Calfthymus DNA )常常作为制作DNA标样的参照物。因为Calf thymus DNA具有双链结构、高度聚合,碱基分配均匀(AT含量58%,GC42%)。如果检测样品的荧光值超过了标准曲线,那么需要将样品做进一步稀释处理。为了保持结果的一致性,务必使每孔上样量均等,且不含有其他高浓度的污染物。
  3. PikoGreen High Sensitivity dsDNA 定量试剂盒可以测量范围在2~100 ng的dsDNA。对于一些不需要线性检测的样品,试剂盒检测范围可以扩展至200 ng。如需检测更低含量的样品,您可以将DNA标样用1×TE缓冲液作进一步的稀释,浓度可以稀释到0.02ng/μL,然后按照常规程序每孔10 μL上样。
  4. 对于不同种类的检测仪器,您可以优化仪器设置,以获取最佳线性度。一些可能会影响最终线性度和相对荧光强度的因素有:(1)激发和发射波长与带宽(2)截止型滤波器(3)灵敏度设置(4)移液的准确性(5)微孔板制造商。为了得到最佳结果,请使用精确校准的移液器和去RNA酶的枪头、试管以及检测板。建议检测时每个DNA标样和未知样品都设定3个复孔。如果检测时不只一块96孔板,建议每块96孔板都设定一条标准曲线,尽量减少检测板之间的误差。

表1:常见的DNA污染物对 PikoGreen High Sensitivity dsDNA 定量试剂盒的影响

复合物

初始浓度

终浓度(200 μL)

结果

醋酸铵

100 mM

5 mM

Pass

醋酸钠

600 mM

30 mM

Pass

氯化钠

200 mM

10 mM

Pass

氯化镁

25 mM

1.25 mM

Pass

苯酚

2 %

0.1 %

Pass

乙醇

10 %

0.5 %

Pass

氯仿

2 %

0.1 %

Pass

十二烷基硫酸钠(SDS)

0.2 %

0.01 %

Pass

Triton X-100

0.2 %

0.01 %

Pass

牛血清白蛋白(BSA)

200 mg/mL

10 mg/mL

Pass*

dNTPs**

2 mM

100 μM

Pass

聚乙二醇

40 %

2 %

Pass

琼脂糖

2 %

0.1 %

Pass

】:3 份dsDNA平行样品的标准曲线,分别在上述含有指定浓度污染物的条件下(初始浓度进行检测,“Pass”指与没有污染物的体系相比较,实验结果变化范围<20%。所有样品用Molecular DevicesGemini XS酶标仪在485 nm处激发,在530 nm处测荧光强度。“Pass *”指由此条件测得的标准曲线有少许变动。“dNTPs**”指dATP, dCTP, dGTP, dTTP的混合物。

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产品货号:

AN54L038

产品规格:

200assays

产品价格:

650

产品描述

PikoGreen dsDNA 定量试剂盒(PikoGreen HighSensitivity dsDNA Quantitation Kit)不同于常规的基于吸光度的测量,这款试剂盒可以区分dsDNA、ssDNA或RNA,有选择性地检测dsDNA(见图1)。与传统DNA定量方法相比,该产品具有检测范围广、高灵敏度、高特异性等优点。试剂盒主要包含PikoGreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Buffer, Enhancer solution以及pre-diluted dsDNA Standards三个组分,可以在200 uL体系内定量0.2~100 ng的dsDNA(见图2)。此外,试剂盒还可以将其他污染物的影响降低至最低,可以耐受常规污染物例如蛋白质,盐,有机溶剂和洗涤剂等(见表1),本试剂盒不具有细胞膜通透性,没有细胞毒性和诱发突变性,对人体安全无害。

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货号

规格

价格

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200 assays

650

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AN54L039

1000 assays

2650

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组分

AN54L038

AN54L039

A: PikoGreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Solution

50 mL

250 mL

B: PikoGreen High Sensitivity dsDNA Enhancer, 100×

0.5 mL

2.5 mL

C: dsDNA Standards 0 , 0.5, 1, 2 ,4 ,6, 8 and 10 ng/uL dsDNA from calf thymus

每组 0.1 mL(8组)

每组 0.5 mL(8组)

运输与保存

蓝冰运输。4℃避光保存,有效期24个月。

使用方法

  1. 使用前,将产品从储存条件下取出恢复至室温。如果100XEnchancer储存液出现沉淀,可37℃水浴溶解。每个组分应充分震荡或涡旋混匀、离心,以免造成不必要的试剂损耗。
  2. 每个待测样品对应200μL的PikoGreen工作液。对于一个96孔板,吸取200μL 100X Enchancer,加入到20 mL Quantitation Solution 中,涡旋混匀,配置成PikoGreen工作液,为得到最佳结果,工作液应在1 h内使用完毕。如果将工作液重新储存并在24 h内使用,结果的准确性会有轻微损失。储存过程中,增强液可能会出现沉淀现象,可以通过涡旋震荡使其重悬。
  3. 对于每个样品,吸取200μL的工作液至黑色的96孔板微孔中。为确保结果精确可靠,建议每个测试样品和DNA标样分别做平行的3个复孔,此过程也可以使用有精确量程的移液排枪进行。黑色的检测板可以减少各测试样品间的荧光干扰。
  4. 在96孔板微孔中,每孔加入10μL的dsDNA标样或未知样品,并用移液器轻轻混匀。
  5. 将微孔板室温避光孵育5~10min,为得到最佳结果,孵育结束后,应立即读取检测板。也可以在6h内读取数据,但结果的精确性会有轻微损失。
  6. 使用激发波长和发射波长在485nm和530nm处的酶标仪测量荧光值。
  7. 制作一条标准曲线,计算检测样品的DNA浓度(见图2)。

】:图2标准曲线仅供参考,您可以根据实际测得的数据自制标准曲线,从而求算样品的浓度。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 对于要检测的植物或动物来源的DNA样本,小牛胸腺DNA(Calfthymus DNA )常常作为制作DNA标样的参照物。因为Calf thymus DNA具有双链结构、高度聚合,碱基分配均匀(AT含量58%,GC42%)。如果检测样品的荧光值超过了标准曲线,那么需要将样品做进一步稀释处理。为了保持结果的一致性,务必使每孔上样量均等,且不含有其他高浓度的污染物。
  3. PikoGreen High Sensitivity dsDNA 定量试剂盒可以测量范围在2~100 ng的dsDNA。对于一些不需要线性检测的样品,试剂盒检测范围可以扩展至200 ng。如需检测更低含量的样品,您可以将DNA标样用1×TE缓冲液作进一步的稀释,浓度可以稀释到0.02ng/μL,然后按照常规程序每孔10 μL上样。
  4. 对于不同种类的检测仪器,您可以优化仪器设置,以获取最佳线性度。一些可能会影响最终线性度和相对荧光强度的因素有:(1)激发和发射波长与带宽(2)截止型滤波器(3)灵敏度设置(4)移液的准确性(5)微孔板制造商。为了得到最佳结果,请使用精确校准的移液器和去RNA酶的枪头、试管以及检测板。建议检测时每个DNA标样和未知样品都设定3个复孔。如果检测时不只一块96孔板,建议每块96孔板都设定一条标准曲线,尽量减少检测板之间的误差。

表1:常见的DNA污染物对 PikoGreen High Sensitivity dsDNA 定量试剂盒的影响

复合物

初始浓度

终浓度(200 μL)

结果

醋酸铵

100 mM

5 mM

Pass

醋酸钠

600 mM

30 mM

Pass

氯化钠

200 mM

10 mM

Pass

氯化镁

25 mM

1.25 mM

Pass

苯酚

2 %

0.1 %

Pass

乙醇

10 %

0.5 %

Pass

氯仿

2 %

0.1 %

Pass

十二烷基硫酸钠(SDS)

0.2 %

0.01 %

Pass

Triton X-100

0.2 %

0.01 %

Pass

牛血清白蛋白(BSA)

200 mg/mL

10 mg/mL

Pass*

dNTPs**

2 mM

100 μM

Pass

聚乙二醇

40 %

2 %

Pass

琼脂糖

2 %

0.1 %

Pass

】:3 份dsDNA平行样品的标准曲线,分别在上述含有指定浓度污染物的条件下(初始浓度进行检测,“Pass”指与没有污染物的体系相比较,实验结果变化范围<20%。所有样品用Molecular DevicesGemini XS酶标仪在485 nm处激发,在530 nm处测荧光强度。“Pass *”指由此条件测得的标准曲线有少许变动。“dNTPs**”指dATP, dCTP, dGTP, dTTP的混合物。

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