产品描述

     TRNzol的主要成分是异硫氰酸胍，它可以破坏细胞，使细胞RNA释放出来，同时保护RNA的完整性，因此，常用于动植物细胞RNA的提取。

保存条件

常温运输，4℃避光保存，保质期一年。

使用方法

1.准备样品 

（1）组织样品

液氮研磨组织法，组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次后，按组织样品质量与TRNzol体积按照50~100mg/mL加入，匀浆。

【注】:组织体积不能超过TRNzol体积的10%， 否则匀浆效果不好，用电动匀浆器匀浆约需1~2 min 。

（2）细胞

对于培养贴壁细胞:不须消化，可直接用TRNzol进行消化及裂解，TRNzol体积按10cm²/mL比例加入。

对于悬浮细胞可直接收集，消化裂解，每1mI TRNzol可裂解 5X106动物、植物或酵母细胞，或1×107细菌细胞。

1. 细胞或组织加TRNzol后，室温放置5 min,使其充分裂解。

【注】: 此时可放入﹣70℃长期保持。

2. 12,000g离心5 min,弃沉淀。

3. 按200 μL氯仿/ml TRNzol加入氯仿，振荡混匀后室温放置15 min。

【注】: 禁用漩涡振荡器，以免基因组DNA断裂。

5. 4℃,12,000g离心15 min 。

5. 吸取上层水相，至另一离心管中。

【注】:千万不要吸取中间界面:若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱，若只提RNA,则弃下层酚相。

7. 0.5ml异丙醇/mI TRNzol加入异丙醇混匀，室温放置5~10 min 。

8. 4℃ 12,000g离心10 min, 弃上清，RNA沉于管底。

9. 按1 mL 75%乙醇/ml TRNzol加入75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。

10. 4℃ 8,000g 离心5 min, 尽量弃上清液。

10. 室温晾干或真空干燥5~10 min。

【注】: RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。

12. 可用50 μL H2O、TE buffer或0.5%SDS溶解RNA样品，55~60℃ ,5~10 min。

【注】: H2O.TE或0.5%SDS均须用DEPC处理并高压。

注意事项

1. 操作人员应经过专门培训，严格遵守操作规程。

2. 操作处置应在具备局部通风或全面通风换气设施的场所进行。

3. 避免眼和皮肤的接触，避免吸入蒸汽。

4. 远离火种、热源，工作场所严禁吸烟。

5. 整个提RNA过程需要无RNase的实验用具。