Western/IP细胞裂解液(带抑制剂)

产品货号:

AP01L076

产品规格:

100mL

产品价格:

218

产品描述

Western及IP裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液,对胞浆亚组分、胞核成分均有较强裂解作用,有利于胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。适用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。

订购信息

产品名称

货号

规格

价格

Western/IP细胞裂解液(带抑制剂)

AP01L076

100 mL

218

产品组分

产品

产品组

产品规格

AP01L076

Western/IP细胞裂解液

100 mL

磷酸酶抑制剂

2*1 mL

PMSF

1 mL

产品说明书

一份

运输与保存

蓝冰运输。裂解液4℃保存,其余-20℃保存,有效期12个月。

使用方法

1. 对于培养细胞样品

(1) 融解Western及IP裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。

(2) 细胞裂解

对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2 s后,细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。具体Western/IP裂解液的使用量参照表1。

(3) 充分裂解后,10000~14000 rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

2.对于组织样品

(1) 把组织剪切成细小的碎片;

(2) 融解Western及IP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。

(3) 按照每20 mg组织加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液,如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。具体Western/IP裂解液的使用量参照表1。

(4) 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。   

(5) 充分裂解后,10000~14000 rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品,含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定蛋白浓度。
  3. 通常6孔板每孔细胞加入100μL裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150 μL或200 μL。
  4. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

表1 Western/IP细胞裂解液的使用量参考表

样品种类

样品来源

收获细胞数

RIPA用量

可制备样品数

细胞

6孔板

2.5*106

150-250 μL

400-600

60 mm培养板

5.2*106

300-500 μL

200-300

90 mm培养板

12.2*106

500-1000 μL

100-200

25 cm2培养瓶

5*106

300-500 μL

200-300

75 cm2培养瓶

2*107

1000-2000 μL

50-100

组织

20 mg组织块

 

150-250 μL

400-600

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AP01L076

产品规格:

100mL

产品价格:

218

产品描述

Western及IP裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液,对胞浆亚组分、胞核成分均有较强裂解作用,有利于胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。适用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。

订购信息

产品名称

货号

规格

价格

Western/IP细胞裂解液(带抑制剂)

AP01L076

100 mL

218

产品组分

产品

产品组

产品规格

AP01L076

Western/IP细胞裂解液

100 mL

磷酸酶抑制剂

2*1 mL

PMSF

1 mL

产品说明书

一份

运输与保存

蓝冰运输。裂解液4℃保存,其余-20℃保存,有效期12个月。

使用方法

1. 对于培养细胞样品

(1) 融解Western及IP裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。

(2) 细胞裂解

对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2 s后,细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。具体Western/IP裂解液的使用量参照表1。

(3) 充分裂解后,10000~14000 rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

2.对于组织样品

(1) 把组织剪切成细小的碎片;

(2) 融解Western及IP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。

(3) 按照每20 mg组织加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液,如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。具体Western/IP裂解液的使用量参照表1。

(4) 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。   

(5) 充分裂解后,10000~14000 rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品,含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定蛋白浓度。
  3. 通常6孔板每孔细胞加入100μL裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150 μL或200 μL。
  4. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

表1 Western/IP细胞裂解液的使用量参考表

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RIPA用量

可制备样品数

细胞

6孔板

2.5*106

150-250 μL

400-600

60 mm培养板

5.2*106

300-500 μL

200-300

90 mm培养板

12.2*106

500-1000 μL

100-200

25 cm2培养瓶

5*106

300-500 μL

200-300

75 cm2培养瓶

2*107

1000-2000 μL

50-100

组织

20 mg组织块

 

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