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Quick Cell 外泌体提取试剂盒(细胞上清专用)

产品货号:

AC15L412

产品规格:

20T

产品价格:

4000

产品描述

外泌体(exosome)是由细胞特异性分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能,参与细胞间的通讯,然而关于它的分泌和摄取及其组成、“运载物”及相应功能的精确分子机制目前尚不明晰。

外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。李记生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,经过优化处理,适用于细胞培养上清液(尿液等)中的外泌体提取,并搭配纯化过滤装置,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒, 可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

订购信息

产品名称

货号

规格

Quick Cell 外泌体提取试剂盒(细胞上清专用)

AC15L412

20T

产品组分

组分

规格

A.    外泌体浓缩试剂(ECS)

100mL

B.     外泌体纯化滤器(EPF)

2.0mL (20Tubes)

 

*RNase/DNase Free, Sterile

运输与保存

常温运输。常温保存,有效期24个月。【注】:使用前请充分混匀。

自备材料

  1. 高速离心机(可以达到10000 g离心力),涡旋振荡器;50 mL或15 mL离心转子,2 mL离心转子;50 mL或15 mL离心管,5 mL离心管;
  2. 1×PBS缓冲液。

使用方法

  1. 样品预处理
  • 取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上。
  • 样品初始用量:对于细胞上清样品,单次提取时的样品量最低为20 mL。
  • 离心去除细胞碎片:将样品转移至离心管中,4℃,3000×g离心10 min,取上清转移到新离心管中。
  1. 提取外泌体
  • 上清液预处理:在去除杂质的离心上清液中加入外泌体浓缩试剂(ECS),加入ECS的量与细胞上清液的体积比为1: 4.即若细胞上清液液体积是20 mL,则ESC的量为5 mL。
  • 溶液混合:加入ECS试剂后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀1 min,再放置于2℃至8℃静置2 h。
  • 沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管,4℃以10000×g离心60 min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒。【注】:尽可能吸净上清液。
  • 外泌体重悬:取100 μL 1×PBS均匀吹打离心沉淀物,待其均匀悬浮在PBS中后,将重悬液转移至新的5 mL离心管中。
  • 收获外泌体颗粒:将含有重悬液的5 mL离心管,4℃以12000×g离心2 min,保留上清液,该上清液中富含外泌体颗粒。
  1. 纯化外泌体
    • 纯化外泌体:将收获的外泌体颗粒粗品转入外泌体纯化滤器(EPF)上室中,4℃,3000×g离心10 min,离心后收集EPF柱管底的液体,此液体即为纯化后的外泌体颗粒。
    • 外泌体的保存:纯化后的外泌体以保存于 -80℃ 低温冰箱中,以备后继实验使用。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 对于待测样品粘度过大时,可将样本用4℃预冷的1×PBS缓冲液进行等体积稀释处理。
  3. 当血清样品收获的外泌体浓度较高,收获的外泌体颗粒无法通过EPF柱纯化时,可用4℃预冷的1×PBS进行稀释后再通过EPF柱离心。
  4. 针对外泌体标志蛋白(CD 63, CD 9, CD 81等)进行Western blot检测,可以鉴定所提的外泌体。
  5. 多数情况下,细胞在体外培养需要血清,但血清中含有外泌体,为了去除血清的外泌体,可以通过100000×g超速离心过夜,去除血清外泌体或者可选择无血清培养基进行培养。
  6. 在收获细胞时,应确定死亡细胞占所有细胞5%以下。细胞死亡过程中会释放大量大小不等的囊泡,细胞最终会裂成碎片,它们在外泌体的纯化过程中会污染活细胞产生的外泌体,影响外泌体的提取。

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外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。李记生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,经过优化处理,适用于细胞培养上清液(尿液等)中的外泌体提取,并搭配纯化过滤装置,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒, 可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

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产品名称

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规格

Quick Cell 外泌体提取试剂盒(细胞上清专用)

AC15L412

20T

产品组分

组分

规格

A.    外泌体浓缩试剂(ECS)

100mL

B.     外泌体纯化滤器(EPF)

2.0mL (20Tubes)

 

*RNase/DNase Free, Sterile

运输与保存

常温运输。常温保存,有效期24个月。【注】:使用前请充分混匀。

自备材料

  1. 高速离心机(可以达到10000 g离心力),涡旋振荡器;50 mL或15 mL离心转子,2 mL离心转子;50 mL或15 mL离心管,5 mL离心管;
  2. 1×PBS缓冲液。

使用方法

  1. 样品预处理
  • 取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上。
  • 样品初始用量:对于细胞上清样品,单次提取时的样品量最低为20 mL。
  • 离心去除细胞碎片:将样品转移至离心管中,4℃,3000×g离心10 min,取上清转移到新离心管中。
  1. 提取外泌体
  • 上清液预处理:在去除杂质的离心上清液中加入外泌体浓缩试剂(ECS),加入ECS的量与细胞上清液的体积比为1: 4.即若细胞上清液液体积是20 mL,则ESC的量为5 mL。
  • 溶液混合:加入ECS试剂后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀1 min,再放置于2℃至8℃静置2 h。
  • 沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管,4℃以10000×g离心60 min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒。【注】:尽可能吸净上清液。
  • 外泌体重悬:取100 μL 1×PBS均匀吹打离心沉淀物,待其均匀悬浮在PBS中后,将重悬液转移至新的5 mL离心管中。
  • 收获外泌体颗粒:将含有重悬液的5 mL离心管,4℃以12000×g离心2 min,保留上清液,该上清液中富含外泌体颗粒。
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    • 纯化外泌体:将收获的外泌体颗粒粗品转入外泌体纯化滤器(EPF)上室中,4℃,3000×g离心10 min,离心后收集EPF柱管底的液体,此液体即为纯化后的外泌体颗粒。
    • 外泌体的保存:纯化后的外泌体以保存于 -80℃ 低温冰箱中,以备后继实验使用。

注意事项

  1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
  2. 对于待测样品粘度过大时,可将样本用4℃预冷的1×PBS缓冲液进行等体积稀释处理。
  3. 当血清样品收获的外泌体浓度较高,收获的外泌体颗粒无法通过EPF柱纯化时,可用4℃预冷的1×PBS进行稀释后再通过EPF柱离心。
  4. 针对外泌体标志蛋白(CD 63, CD 9, CD 81等)进行Western blot检测,可以鉴定所提的外泌体。
  5. 多数情况下,细胞在体外培养需要血清,但血清中含有外泌体,为了去除血清的外泌体,可以通过100000×g超速离心过夜,去除血清外泌体或者可选择无血清培养基进行培养。
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