A2：能不加尽量不加，理论上抗生素进不到细胞内，但是在转染试剂的作用下，细胞的通透性增加，抗生素可能进到细胞内，对实验结果完成影响。

A3：EZ Trans细胞转染液属于阳离子类型的转染试剂，它与DNA形成复合物需要一定的条件，在合适的浓度下，有利于阳离子包裹DNA形成良好形态的复合物进入细胞。如果直接把两者直接混合，两者容易很快形成聚合物，聚集相态多样，有可能使DNA暴露在表面，不容易进入细胞，进而降低转染效率。所以EZ Trans和DNA的混合顺序也很重要。 培养细胞大多会用到胎牛血清，血清成分复杂，没有人能说清成分及含量。细胞转染液成分比较明确，但是不能确定是会不会与胎牛血清的不知名成分结合，事实上这种现象在大多数转染试剂中都会造成不良影响，所以在形成EZ Trans-DNA复合物过程中要避免血清的影响。

A4：所有时间都是从EZ Trans-DNA复合物与细胞接触开始算。

A5：体内直接转染目前最多的是腺病毒，慢病毒，腺相关病毒。转染试剂直接在体内用的报道我们目前没有听过。现有的做法是细胞在体外培养，转染筛选后再打入体内。

A6：转染RNA，可以转的，但因为对不同细胞毒性不同，所以对RNA转染后的效率，和研究结果需要摸索（目前收集数据下来，有一半的客户反馈可以转RNA，一般客户反馈效果不好）。 这方面和脂质体转染一样，一般转染RNA都是研究功能的，转染试剂的细胞毒性对判定小RNA的功能，可能有干扰，需要老师做预实验

A7：可以用这个培养基，只要不影响细胞生长就行。只不过转染配置的过程中，不加血清就行。 如果不能用optimem来配制和转染，只能用cd2，那他就用cd2来配制和转染，当然最好能做下预实验。

A8：在制备生成DNA-转染试剂复合物时，请不要使用含有血清的产品。在大多数情况下，使用不含血清的DMEM培养液能获得高效率的DNA-转染试剂复合物。我们建议使用含血清介质转染，单主人南复合物必须在无血清中形成。注意：最好也能避免Opti-MEN培养液，即使其血清含量较低。

A9：不含血清的培养液是高效DNA-转染试剂复合物形成的关键。在生成复合物过程中，避免使用一下化学物质：高浓度的磷酸盐、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸葡聚糖或其他硫酸化的蛋白聚糖等。

A10：在制备生成DNA-抓让试剂复合物时，请使用无血清培养基或者Opti-MEM培养。在大多数情况下，使用不含血清的DMEM培养基能获得提高效率的DNA-转染试剂复合物。

A11：在DNA转染和DNA-siRNA共转染过程中，细胞密度控制在60%-70%之间；在siRNA转染过程中，细胞密度控制在50%左右。

A12：建议每次转染时，设定一个阳性对照，如绿色荧光蛋白(GFP）。

A13：EZ Trans细胞转染试剂应保存在4℃。转染复合物的最佳放置试剂和温度是室温条件下10-20分钟，长时间放置会显著地降低转染效率，请务必控制放置时间在20分钟之内。

A14：在形成转染复合物时，标准操作步骤推荐数秒内涡旋混合转染试剂和DNA或siRNA以生产高效转染复合物。如果想将粘附于管壁的复合物离心，请务必使用极低转速离心，如80g离心5秒。

A15：建议绘制量效关系曲线来确定最佳的DNA用量。

A16：建议绘制量效关系曲线来确定最佳的转染试剂用量。

A17：EZ Trans细胞转染试剂的转染效率不受培养液中的血清影响，因此建议转染过程中细胞的培养液使用含有10%胎牛血清和抗生素的完全培养液以改善细胞的状态。

A18：请在转染48h后加入选择用抗生素。