产品描述
EZ Trans RNA转染试剂(下文简称EZ Trans)采用新型脂质体纳米材料,可用来转染siRNA、miRNA等150bp以内的小分子RNA和DNA,转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞,如一般细胞株、肿瘤细胞株等。
本转染试剂是一类快捷高效即用型试剂溶液,仅需在EP管中将细胞培液与siRNA或miRNA等转染目的小 RNA同转染试剂混合,室温孵育约 2 min后加入完全细胞培养液中即可,血清对转染效果没有影响,实验过程无需刻意添加或更换培养液。
产品组分
产品名称 |
规格 |
EZ Trans RNA转染试剂 |
1 mL |
运输与保存
蓝冰运输。4℃保存,有效期 12 个月。 【注】: 不可冷冻!
使用方法
本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
特级胎牛血清(Foetal Bovine Serum)
细胞生物学, 动物细胞培养
青-链霉素混合液(双抗,100X)
细胞生物学, 动物细胞培养
Q1:我们传的细胞有抗生素,抗生素是绝对会影响转染效率吗?
A1:能不加尽量不加,理论上抗生素进不到细胞内,但是在转染试剂的作用下,细胞的通透性增加,抗生素可能进到细胞内,对实验结果完成影响。
Q2:protocol提到,要用Opti-MEM稀释质粒和转染试剂。不能用1640稀释么?另外质粒和转染试剂为什么要先稀释然后再混合?不能把转染试剂直接加到质粒溶液中混合,然后再加培养基稀释么?
A2:EZ Trans细胞转染液属于阳离子类型的转染试剂,它与DNA形成复合物需要一定的条件,在合适的浓度下,有利于阳离子包裹DNA形成良好形态的复合物进入细胞。如果直接把两者直接混合,两者容易很快形成聚合物,聚集相态多样,有可能使DNA暴露在表面,不容易进入细胞,进而降低转染效率。所以EZ Trans和DNA的混合顺序也很重要。 培养细胞大多会用到胎牛血清,血清成分复杂,没有人能说清成分及含量。细胞转染液成分比较明确,但是不能确定是会不会与胎牛血清的不知名成分结合,事实上这种现象在大多数转染试剂中都会造成不良影响,所以在形成EZ Trans-DNA复合物过程中要避免血清的影响。
Q3:protocol提到,“24-48小时内检测转染效率”指的是去除含复合物的培养液换成含血清的培养基之后的24-48h,还是指加入复合物后转染24-48h?
A3:所有时间都是从EZ Trans-DNA复合物与细胞接触开始算。
Q4:转染效率低-没有生成高效率的DNA-转染试剂复合物
A4:在制备生成DNA-转染试剂复合物时,请不要使用含有血清的产品。在大多数情况下,使用不含血清的DMEM培养液能获得高效率的DNA-转染试剂复合物。我们建议使用含血清介质转染,单主人南复合物必须在无血清中形成。注意:最好也能避免Opti-MEN培养液,即使其血清含量较低。
Q5:转染效率低-生成DNA-转染试剂复合物过程中存在抑制复合物形成的抑制剂
A5:不含血清的培养液是高效DNA-转染试剂复合物形成的关键。在生成复合物过程中,避免使用一下化学物质:高浓度的磷酸盐、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸葡聚糖或其他硫酸化的蛋白聚糖等。
Q6:转染效率低-转染试剂复合物中含有血清
A6:在制备生成DNA-抓让试剂复合物时,请使用无血清培养基或者Opti-MEM培养。在大多数情况下,使用不含血清的DMEM培养基能获得提高效率的DNA-转染试剂复合物。
Q7:转染效率低、细胞毒性大-细胞密度未优化
A7:在DNA转染和DNA-siRNA共转染过程中,细胞密度控制在60%-70%之间;在siRNA转染过程中,细胞密度控制在50%左右。
Q8:怎么确定确定实验的转染效率?
A8:建议每次转染时,设定一个阳性对照,如绿色荧光蛋白(GFP)。
Q9:转染效率低-将转染复合物长时间放置于室温
A9:EZ Trans细胞转染试剂应保存在4℃。转染复合物的最佳放置试剂和温度是室温条件下10-20分钟,长时间放置会显著地降低转染效率,请务必控制放置时间在20分钟之内。
Q10:转染效率低-高转速离心转染复合物
A10:在形成转染复合物时,标准操作步骤推荐数秒内涡旋混合转染试剂和DNA或siRNA以生产高效转染复合物。如果想将粘附于管壁的复合物离心,请务必使用极低转速离心,如80g离心5秒。
Q11:细胞毒性大-DNA用量太大
A11:建议绘制量效关系曲线来确定最佳的DNA用量。
Q12:细胞毒性大-转染试剂用量太大
A12:建议绘制量效关系曲线来确定最佳的转染试剂用量。
Q13:细胞毒性大-转染时细胞状态较差
A13:EZ Trans细胞转染试剂的转染效率不受培养液中的血清影响,因此建议转染过程中细胞的培养液使用含有10%胎牛血清和抗生素的完全培养液以改善细胞的状态。
Q14:细胞毒性大-稳定转染时抗生素加入太早
A14:请在转染48h后加入选择用抗生素。
EZ Trans RNA转染试剂
产品价格:1600
产品描述
EZ Trans RNA转染试剂(下文简称EZ Trans)采用新型脂质体纳米材料,可用来转染siRNA、miRNA等150bp以内的小分子RNA和DNA,转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞,如一般细胞株、肿瘤细胞株等。
本转染试剂是一类快捷高效即用型试剂溶液,仅需在EP管中将细胞培液与siRNA或miRNA等转染目的小 RNA同转染试剂混合,室温孵育约 2 min后加入完全细胞培养液中即可,血清对转染效果没有影响,实验过程无需刻意添加或更换培养液。
产品组分
产品名称 |
规格 |
EZ Trans RNA转染试剂 |
1 mL |
运输与保存
蓝冰运输。4℃保存,有效期 12 个月。 【注】: 不可冷冻!
使用方法
本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
Q1:我们传的细胞有抗生素,抗生素是绝对会影响转染效率吗?
A1:能不加尽量不加,理论上抗生素进不到细胞内,但是在转染试剂的作用下,细胞的通透性增加,抗生素可能进到细胞内,对实验结果完成影响。
Q2:protocol提到,要用Opti-MEM稀释质粒和转染试剂。不能用1640稀释么?另外质粒和转染试剂为什么要先稀释然后再混合?不能把转染试剂直接加到质粒溶液中混合,然后再加培养基稀释么?
A2:EZ Trans细胞转染液属于阳离子类型的转染试剂,它与DNA形成复合物需要一定的条件,在合适的浓度下,有利于阳离子包裹DNA形成良好形态的复合物进入细胞。如果直接把两者直接混合,两者容易很快形成聚合物,聚集相态多样,有可能使DNA暴露在表面,不容易进入细胞,进而降低转染效率。所以EZ Trans和DNA的混合顺序也很重要。 培养细胞大多会用到胎牛血清,血清成分复杂,没有人能说清成分及含量。细胞转染液成分比较明确,但是不能确定是会不会与胎牛血清的不知名成分结合,事实上这种现象在大多数转染试剂中都会造成不良影响,所以在形成EZ Trans-DNA复合物过程中要避免血清的影响。
Q3:protocol提到,“24-48小时内检测转染效率”指的是去除含复合物的培养液换成含血清的培养基之后的24-48h,还是指加入复合物后转染24-48h?
A3:所有时间都是从EZ Trans-DNA复合物与细胞接触开始算。
Q4:转染效率低-没有生成高效率的DNA-转染试剂复合物
A4:在制备生成DNA-转染试剂复合物时,请不要使用含有血清的产品。在大多数情况下,使用不含血清的DMEM培养液能获得高效率的DNA-转染试剂复合物。我们建议使用含血清介质转染,单主人南复合物必须在无血清中形成。注意:最好也能避免Opti-MEN培养液,即使其血清含量较低。
Q5:转染效率低-生成DNA-转染试剂复合物过程中存在抑制复合物形成的抑制剂
A5:不含血清的培养液是高效DNA-转染试剂复合物形成的关键。在生成复合物过程中,避免使用一下化学物质:高浓度的磷酸盐、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸葡聚糖或其他硫酸化的蛋白聚糖等。
Q6:转染效率低-转染试剂复合物中含有血清
A6:在制备生成DNA-抓让试剂复合物时,请使用无血清培养基或者Opti-MEM培养。在大多数情况下,使用不含血清的DMEM培养基能获得提高效率的DNA-转染试剂复合物。
Q7:转染效率低、细胞毒性大-细胞密度未优化
A7:在DNA转染和DNA-siRNA共转染过程中,细胞密度控制在60%-70%之间;在siRNA转染过程中,细胞密度控制在50%左右。
Q8:怎么确定确定实验的转染效率?
A8:建议每次转染时,设定一个阳性对照,如绿色荧光蛋白(GFP)。
Q9:转染效率低-将转染复合物长时间放置于室温
A9:EZ Trans细胞转染试剂应保存在4℃。转染复合物的最佳放置试剂和温度是室温条件下10-20分钟,长时间放置会显著地降低转染效率,请务必控制放置时间在20分钟之内。
Q10:转染效率低-高转速离心转染复合物
A10:在形成转染复合物时,标准操作步骤推荐数秒内涡旋混合转染试剂和DNA或siRNA以生产高效转染复合物。如果想将粘附于管壁的复合物离心,请务必使用极低转速离心,如80g离心5秒。
Q11:细胞毒性大-DNA用量太大
A11:建议绘制量效关系曲线来确定最佳的DNA用量。
Q12:细胞毒性大-转染试剂用量太大
A12:建议绘制量效关系曲线来确定最佳的转染试剂用量。
Q13:细胞毒性大-转染时细胞状态较差
A13:EZ Trans细胞转染试剂的转染效率不受培养液中的血清影响,因此建议转染过程中细胞的培养液使用含有10%胎牛血清和抗生素的完全培养液以改善细胞的状态。
Q14:细胞毒性大-稳定转染时抗生素加入太早
A14:请在转染48h后加入选择用抗生素。