BCA蛋白定量试剂盒有什么作用（附带产品说明书）-Industry information-He Yuan Li Ji

BCA蛋白定量试剂盒有什么作用（附带产品说明书）

Pubtime：2025-01-10

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BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，在562 nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。测定其在562 nm处的吸光值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。该方法快速灵敏、稳定可靠且对不同种类蛋白质变异系数很小。试剂盒中提供了浓度稳定的蛋白标准品用于制作标准曲线。

BCA蛋白定量试剂盒产品作用
准确灵敏，线性范围广：BCA 试剂的蛋白质测定范围是 10-2000μg/mL。

快速：45 分钟内完成测定，比经典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。

经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。

效果稳定：不受样品中离子型和非离子型去污剂影响，检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝。

BCA蛋白定量试剂盒使用说明（详细说明书访问：BCA产品说明书）

一、配制标准品和工作液

1. 配制 BSA 标准品体系（线性范围 20-2000 μg/mL 或者 5-250μg /mL 标准品制备各 2 种配置方法，请根

据习惯选用恰当方式）。

2. 配制 BCA 工作液

(1) 计算所需要的总 BCA 工作液体积。总 BCA 工作液体积=（标准品数量+待测样品数量）x 重复数 x 每个

样品所需要的 BCA 工作液。

(2) 配制 BCA 工作液：50 体积的 BCA 试剂 A 中加入 1 体积的 BCA 试剂 B（A:B=50:1），充分混匀。

二、检测方法

1. 试管检测方法（样品:BCA 工作液=1:20）

(1) 各取 100 μL 标准品和待测样品加入到反应管中。

(2) 每管加入 2.0 mL BCA 工作液，混匀。根据待测样品的浓度范围选择孵育时间和温度。

标准孵育方法：37℃ 孵育 30 min 或者室温 2h（检测范围：20-2000 μg/mL）

增强孵育方法：60℃ 孵育 30 min（检测范围：5-250 μg/mL）

(3) 冷却到室温。在分光光度计上进行检测，设定波长为 562 nm，在 10 min 内对所有样品读数。

(4) 根据 BSA 标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的 OD 值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓

度μg/mL；Y-最终的 OD 562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

2. 微孔板检测方法（样品: BCA 工作液=1:20）

(1) 各取 10 μL 标准品和待测样品加入到微孔板中。

(2) 每孔加入 200 μL BCA 工作液，枪头吹打充分混匀。盖上微孔板，37℃ 孵育 30 min。

(3) 冷却到室温，在酶标仪上的 562 nm 波长范围处检测吸光度。

(4) 根据 BSA 标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的 OD 值即最终的读数），绘制标准曲线（ X-蛋白浓

度μg/mL；Y-最终的 OD 562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

BCA蛋白定量试剂盒注意事项

1、为保证蛋白浓度测量的准确性，最好做3个复孔，必要时剔除离群值。

2、BCA法测蛋白浓度易受时间及温度的影响，所以最好每次测定都做标准曲线。

3、加样时一定要准确加样且尽可能避免气泡产生，以免影响测量（加样结束可以用注射器戳破气泡，并将96孔板放在摇床上混匀片刻，以使样品与工作液充分接触）。

4、孵育结束应尽快检测吸光度，并尽可能加快检测速度，以免带来误差。

5、确保所有试剂在使用前充分混合且在推荐的温度下存储。试剂的新鲜度对实验结果有显著影响，过期或不当存储的试剂可能导致不准确的结果。

6、在进行BCA实验时，严格按照试剂添加顺序和操作步骤进行，避免任何步骤的颠倒或省略。

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