鬼笔环肽染色原理（Alexa Fluor 488 标记鬼笔环肽使用方法）-Industry information-He Yuan Li Ji

鬼笔环肽染色原理（Alexa Fluor 488 标记鬼笔环肽使用方法）

Pubtime：2024-10-15

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鬼笔环肽是一种双环七肽毒素，它能选择性的与动植物体内的纤维状的肌动蛋白 (F-actin) 结合，这种特殊的选择性使之成为研究细胞内肌动蛋白微丝 (F-actin) 的有力工具。在光学显微镜下, 荧光标记过的鬼笔环肽 (phalloidin-dye conjugate) 可以清晰地显示出细胞内微丝的形态和分布，广泛被应用于生物医学的研究当中。

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鬼笔环肽染色原理

荧光标记的鬼笔环肽在纳克水平就可与F-actin选择性的结合并且易溶于水，为检测组织切片，培养细胞和无细胞体系中的actin的定位和定量提供了非常方便的标记方法。通过其荧光特性，在特定波长光的激发下发出荧光，使得细胞内肌动蛋白丝的结构和分布清晰可见。
鬼笔环肽使用方法

以Alexa Fluor 488 标记鬼笔环肽（绿色）为例

第1：准备1× Alexa Fluor 488标记鬼笔环肽工作液吸取1 μL 1000×Alexa Fluor 488标记鬼笔环肽存储液到1 mL 含有1% BSA的PBS缓冲液中即可得到1×工作液。

第2：细胞染色步骤

(1) 细胞培养过夜或更长，使其密度达到50~60% 汇合度。

(2) 吸掉培养液，37℃ 预热的1×PBS（pH 7.4）清洗细胞2次。

(3) 使用含有3-4% 甲醛的PBS溶液进行细胞固定，室温固定10~30 min。

(4) 室温条件下，用PBS清洗固定好的细胞2~3次，每次10 min。

(5) （可选）：室温条件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化处理3~5 min，从而增加其通透性。

(6) 室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10 min。

(7) 每孔加入 Alexa Fluor 488标记鬼笔环肽工作液100 μL /孔（96孔板），室温避光染色20~90 min，夏季时间相对短些。

(8) 用PBS清洗细胞3次，每次5 min，去除掉多余的Alexa Fluor 488标记鬼笔环肽。

(9) （可选）：加入足量的即用型DAPI溶液对细胞核进行复染，如：100 μL /孔（96孔板），室温3~5 min。用PBS清洗细胞2次，每次5 min。

(10) 于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择Alexa FluorTM 488激发/发射滤片和/或DAPI激发/发射滤片（Ex/Em=364/454nm）。
鬼笔环肽注意事项

✔ 储存条件：鬼笔环肽及其荧光标记衍生物应储存在-20℃以下，保持干燥并避光。

✔ 细胞处理：在进行鬼笔环肽染色前，细胞应经过适当的固定和渗透处理，以确保染色效果。

✔ 荧光显微镜设置：根据所使用的荧光标记鬼笔环肽的激发和发射波长，调整荧光显微镜的设置以获得最佳的观察效果。

✔ 不同的细胞染色情况不同，相应Alexa Fluor鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

✔ 毒性较大，需带上手套操作

✔ 避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

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[品牌] 和元李记

[产品] 488 标记鬼笔环肽（绿色）

[货号] AC18L032

[规格] 300T

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