常见问题-试剂产品问题解答-和元李记

Q：BCA蛋白定量法的优缺点有哪些？

优点：
1、此方法被广泛选用，操作简便、快速，45分钟内即可完成测试。比经典的Lowery法快4倍且更加；
2、不易受一般浓度去污剂、尿素等影响，抗干扰能力强；
3、检测不同蛋白质分子的变异系数也远小于考玛斯亮蓝法；
4、准确，灵敏度高，试剂稳定性好。BCA法在20-20 ug/mL浓度大范围内具有良好的线性关系，微量BCA测定范围在0.5-10 ug/ml。
5、经济实用，除试管外，测定可在微板孔中就进行，大大节约样品和试剂用量；
缺点：
1、可能会受螯合剂（EDTA、EGTA）和高浓度还原剂（DTT、β-巯基乙醇）的影响；
2、需要30分钟或者更长时间的恒温水浴孵育反应。
Q：支原体清除剂可以和双抗一起用吗

不得与除青链霉素双抗外其它抗生素混用。
李记生物Quick Cell支原体清除剂（1000X），通过抑制支原体DNA回旋酶活性，进而有效抑制支原体DNA的复制，从遗传物质着手彻底杀灭支原体，让细胞彻底摆脱支原体污染的困扰，确保验结果的可信度。
主要用于清除细胞、血清、培养基中的支原体，整个过程仅需 3-5 d即可；本产品能够清除大部分种类的支原体，而对细胞本身无毒。
李记已验证上百种细胞，如：小鼠胚胎干细胞或iPS 细胞、人胚胎干细胞或iPS 细胞、HEK293、Hela、HepG2、HCT116、COS-7、Vero、Huh-7、MDCK、PANC-1、SW620、U2OS、MCF-7、MRC-5、NIH-3T3、CCC-ESF、CHO-S、CHO-K1、CHO-DG44、H295R、HL60、K562、MDA-MB-231、SP20、T47D、BM 和BV2 等。
Q：长期保存肿瘤组织活性选择哪个试剂盒比较好？

活组织冻存试剂盒玻璃化冻存组织，可有效维持组织的形态结构和功能，组织活性从分子水平到组织水平均可得到高效保存，实现组织活性的长期高效保存，适用于动物组织和肿瘤组织的冷冻保存。活组织复苏试剂盒配合冻存试剂盒使用，即时复苏，可高效复苏保存组织活性。
产品特点：
• 玻璃化冻存技术，无需程序降温；
• 复苏后组织活性可保存80%以上，用于构建PDX/PDC模型，药敏试验及单细胞测序等；
• 无细菌、无真菌，无支原体；
• 2～8℃密封保存，有效期1年；
Q：活组织冻存复苏试剂盒的优势有哪些？

冻存：
✔ 冻存前后PDX成瘤能力基本不变；
✔ 冻存后可长期保存；
✔ 可替代冰冻切和石蜡包埋组织；
✔ 实现DNA、RNA和蛋白活性保存；
复苏：
✔ 复苏后形态功能与新鲜组织一致；
✔ 复苏后仍可分离原代细胞；
Q：李记生物的慢病毒保存液里面含DMSO吗？

李记生物的EZ 慢病毒冻存液产品中的缓冲液组分经过优化，使用了Hepes和碳酸氢钠进行缓冲，添加了L-谷氨酰胺、微量元素、冻存保护剂等成分，不含DMSO，适用于超速离心后、PEG沉淀后、超滤浓缩后的慢病毒重悬。使用本产品重悬后的慢病毒颗粒毒性小、存储时间久、反复冻融次数多。
Q：预染蛋白质Marker在转印过程中条带在膜上褪色？

褪色最可能是由于封闭/洗涤液中的洗涤剂将一些蛋白质从膜上洗脱造成的。染料本身不会从蛋白质上洗脱，因为它们是共价结合的。已经发现较小孔径的膜可以在封闭和洗涤过程中更好地保留蛋白质，因此，为了获得绝佳的分辨率和蛋白质保留率，推荐使用0.2 µm代替0.45 µm的膜。转印后，可以用铅笔在膜上圈出预染条带，从而在封闭和处理后仍可辨认条带位置。
Q：做WB实验时，预染蛋白Marker条带为什么也曝光？

预染蛋白Marker是由重组蛋白组成，可能所使用的蛋白Marker含有His标签。若一抗使用的是his标签，二抗除了跟带his标签的一抗结合外，还会跟带His标签的蛋白Marker条带结合，因此，加入ECL发光液后，蛋白Marker和样品中目的蛋白一同曝光。
Q：预染蛋白Marker能否被考马斯亮蓝染色？

有些预染Marker可以被考马斯亮蓝染色，有些不可以。原因：考马斯亮蓝含有偏酸性的基团，如R-250分子中，含有两个-HSO3，酸性基团可以结合到蛋白质的碱性基团上，从而使得蛋白染上颜色，蛋白量越高，颜色越深。预染蛋白Marker为不同大小的蛋白和染料共价结合，根据染料的不同，结合蛋白质的位置也不同，如果Marker上染料结合了考马斯亮蓝结合基团，则不能够再次结合考马斯亮蓝去染色。否则考马斯亮蓝能够结合可以染色。
Q：使用预染蛋白Marker有哪些注意事项

1）由于预染的蛋白Marker与染料的偶联作用导致在不同缓冲液中Marker迁移率不同，使用前需注意选择适当缓冲体系。若使用说明书中未涉及的电泳缓冲液，建议用非预染蛋白Marker对该预染蛋白Marker先进行分子量标定；
2）在低浓度胶中，低分子量蛋白会泳动于染料前缘；
3）大分子量蛋白Western blot时需要延长转膜时间或加高转膜电压。
Q：培养的细胞出现细菌污染怎么判断?

细菌污染的细胞过夜培养后，培养基会显著变黄，培养瓶内肉眼可见细菌沉淀，晃动培养基会有浑浊现象，显微镜下观察细胞可以看到很细的沙状物覆盖整个培养瓶底部。细胞碎片与污染的分辨可以通过过夜培养判断，过夜不会浑浊的主要是细胞碎片及代谢产物，过夜会明显变黄浑浊的可以判断为污染。细胞出现细菌污染一般1-2天即会爆发至肉眼可见状态，细菌污染一般不会交叉污染，及时处理掉污染的细胞即可。

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