常见问题-试剂产品问题解答-和元李记

Q：组织运输液和RNA later区别在哪？

RNAlater溶液是一种水溶性、无毒性组织储存试剂，其可迅速渗透到组织内以稳定和保护细胞的RNA。我们的组织运输液有效降低组织在低温、储存时发生的损伤，避免组织生物成分降解，以及酶和RNA失活，保护细胞膜和组织结构完整。稳定生物活性，维持形态结构和功能。新鲜组织储存后，可用于病理和生理学检测分析。成分明确，不含蛋白和动物来源成分。

Q：培养基中添加抗生素的原因是什么？

添加抗生素可以有效抑制培养物中的细菌、真菌等微生物的污染，保持培养物的纯净度。常用的抗生素有青霉素、链霉素、庆大霉素等。但需要注意的是，抗生素的添加应该谨慎，过量使用可能会对细胞产生不良影响。

Q：培养基中添加的胰酶的作用是什么？

胰酶在培养基中主要用于细胞的消化和传代。胰酶可以降解细胞外基质，使细胞能够从培养瓶底脱落，并且可以促进细胞的分裂和增殖。在传代过程中，胰酶的作用可以帮助细胞的分离和传代操作。

Q：胰蛋白酶与胶原蛋白酶作用一样吗？

要使细胞相互分离，可以用酶将细胞间粘连着的蛋白质(如胶原蛋白、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、弹性蛋白等)消化了。教材采用的酶是胰蛋白酶或胶原蛋白酶，这里的“或”不是任意选择的意思，因为这2种酶的作用对象并不一样。

胰蛋白酶是一种胰脏制品，能强烈地消化细胞间质较少的软组织如肝、肾、甲状腺﹑羊膜、胚胎组织等，而对含结缔组织较丰富的如乳腺、滑膜、子宫、纤维肉瘤﹑肿瘤组织等则无效，而且如果消化时间过长，还会损害细胞的呼吸酶和细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此，消化后要马上对培养细胞进行洗涤。

胶原蛋白酶则是一种从细菌中提取出来的酶，适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织，它对细胞间质中的胶原成分有较好的消化作用，虽然作用缓慢但因对细胞本身影响不大，故还是能达到分散细胞的目的。

Q：为何细胞培养基偏黄或偏紫？

细胞培养基变黄是因为细胞密度过大产生大量酸性代谢废物，PH升高后导致酚红变色，提示细胞营养不足。细胞培养基变紫是因为培养液中CO2 逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性从而变紫。

Q：如何控制胰酶消化时间？

倒置显微镜下观察细胞明显变圆、变亮且细胞间隙增大，轻轻晃动可见悬浮细胞、但还没有出现大片脱落时即可终止（不可过分消化、影响细胞活性；新买的细胞建议每30秒观察记录最佳时间）。

Q：提取原代细胞经常发生污染可以怎样改善？

首先要确保细胞分离实验室是否存在细菌污染，如果存在问题，需要将实验室进行消毒，培养箱灭菌，检查试剂耗材是否可用，第二个就是注意无菌操作，保证试剂、剪刀镊子等无菌，第三是可以在培养液中加抗生素，双抗、两性霉素等。

Q：贴壁的原代细胞很难消化是怎么回事？

细胞初代培养时在细胞皿上培养的时间过长，解决方法可以将酶的浓度降低，37℃培养箱中延长消化时间，或者分步消化。

Q：原代细胞可以冻存吗？冻存复苏后活率差的原因是什么？

这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞，不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等，可以扩增培养和再次冻存。然而，需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。冻存后复苏活率低需要考虑冻存前细胞活性，细胞量以及冻存体系，冻存体系是指用的含血清的冻存液，还是一步冻存液，不同冻存方法对应的操作方法不同需要注意。

Q：原代细胞一般第几代做实验比较好？

5代以内，3代最好。