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转录组学

转录组即特定细胞在某一功能状态下转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。通常指某一状态下的所有mRNA转录本。 技术优势   高覆盖度:单次转录组测序实验即可获取全面的编码RNA信息。链特异性文库:采用dUTP链特异性文库构建方案,确保转录本的方向性,获取更准确的定量结果。关联分析:联合多个组学数据,开展跨组学关联分析。 技术路线 Total RNA 抓取polyA RNA 文库构建(dUTP链特异性 上机测序(HiSeq 4000,PE150) 数据分析 分析内容 有参考基因组的转录组测序: 1. 原始数据产出统计;  2. 与参考基因组比对及统计; 3. 基因和转录本表达丰度分析; 4. 转录组水平SNP和InDel分析; 5. GO功能分析; 6. KEGG代谢通路分析; 7.基因差异表达谱分析(聚类图,散点图,火山图); 8. 差异表达基因的GO功能富集性分析,KEGG代谢通路富集性分析; 9.新转录本预测; 10.可变剪切分析; 11.DEU(Differential Exon Usage)分析(限生物学重复样品)。 无参考基因组的转录组测序: 1.原始数据产出统计与基本质控处理; 2.转录本拼接(根据测序数据获得转录本序列); 3.Unigene和transcript的长度分布统计及GC含量统计; 4.根据拼接结果序列进行预测编码蛋白框(CDS); 5.Unigene功能注释(NR、Swissport、KOG、KEGG、Pfam); 6.Unigene的GO(Gene Ontology)注释结果; 7.Unigene的KEGG代谢通路注释; 8.Unigene的KOG注释结果; 9.转录组水平SNV/SNP分析; 10.Unigene的SSR分析(SSR数据信息、SSR分布统计); 11.根据RPKM计算标准对基因表达丰度进行分析(表达量数据信息、表达情况统计); 12.样本间的基因表达差异分析; 13.差异表达基因的GO功能富集性分析,KEGG代谢途径富集性分析。 样本类型   细胞,组织,全血,血清,血浆,总RNA等建议总RNA起始量:2 μg,最低1 μg,浓度≥50 ng/μL 结果展示   1.差异基因聚类分析热图用于判断基因在不同实验条件下调控模式的聚类模式根据样品基因表达谱的相近程度,将基因进行聚类分析,直观地展示基因在不同样品(或是不同处理)中的表达情况,由此获取生物学相关信息。  差异显著差异表达基因上下调频数统计柱状图,用于统计差异基因数目。  2.θπ 选择消除分析图图中横坐标表示染色体位置,纵坐标反映核苷酸多态性水平。从图中可以看出,在1 号染色体的不同位置,玉米的 parviglumis 品种(绿线)、地方品种(红线)和改良品种(蓝线)的多态性水平。   2.差异表达基因分析火山图用于了解差异表达基因的整体分布情况。以log2(foldchange)为横坐标,-log10(pvalue)为纵坐标,对差异表达分析中所有的基因绘制火山图。其中横坐标代表基因在不同样本中差异表达倍数变化;纵坐标代表基因表达量变化差异的统计学显著性。   3.差异基因GO富集柱状图用于反映在生物过程(biological process)、细胞组分(cellular component)和分子功能(molecular function)富集的GO term上差异基因的个数分布情况   4.GO功能富集散点图用于展示GO term的富集情况。Rich factor表示位于该GO的差异基因个数/位于该GO的总基因数,Rich factor越大,GO富集程度越高。   5.皮尔森相关系数图用于反映生物学重复、样本相关性,确保后续的差异基因分析得到更可靠的结果。   6.可变剪切统计图对该物种及其相应的测序样品进行可变剪切事件的分类及统计。     常见问题   1.转录组测序和DGE的关系是什么?转录组和DGE主要的差别在于数据量和分析内容上,转录组的数据量较大,除了分析差异基因,还可以进行基因结构分析;而DGE就是数字基因表达谱,它的数据量较小,一般只分析差异基因,不能进行基因结构分析。

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miRNA测序

小RNA是生物体内一类具有重要调控功能的非编码短小RNA的总称。大量研究已经证实,小RNA几乎参与调控了动植物所有的生命过程,包括细胞增殖,分化,凋亡等,并且与人类疾病的发生发展密切相关。小RNA测序正是对这一类重要的调控小RNA——特别是microRNA(miRNA)展开分析,利用高通量测序技术对样本中18~30nt的小RNA序列进行鉴定和分析。 技术优势   文库优化:针对动植物miRNA序列的不同特别,优化文库制备流程,最大程度地富集样本小RNA序列独家分析软件:拥有自主开发的数据分析软件ACGT101-miR,可靠性已被数百个实验项目检验;生成图表可直接用于论文撰写。项目经验丰富:国内最早提供小RNA测序服务的公司之一,用户已发表上百篇小RNA测序相关论文。 技术路线 Total RNA 3’及5’接头连接 反转录 PCR扩增 PAGE纯化 上机测序(HiSeq 2500,SE50) 数据分析 分析内容   1、数据质控:测序质量值分布统计;测序碱基质量控制;测序数据产出统计。2. 可比对测序数据的获得3. miRNA数据库以及测序物种基因组比对4. 与其他RNA数据库的比对5. 预测全新的miRNA6. miRNA序列本身相关分析7. miRNA定量分析,多样品miRNA的表达差异分析;差异表达miRNA筛选;差异表达miRNA统计;miRNA表达模式聚类分析(仅限多样本项目)。8. 重复相关性检测(仅限生物学重复样本)。9. 差异表达miRNA的靶基因预测(植物采用Targetfinder软件,动物采用Targetscan和miRanda软件0)10. 差异表达miRNA的靶基因GO,KEGG注释与GO,KEGG富集性以及pathway 通路分析和pathway network分析。(仅限多样本项目)差异表达miRNA的靶基因GO,KEGG注释与GO,KEGG富集性以及pathway 通路分析和pathway network分析。(仅限多样本项目) 样本类型   细胞,组织,体液、血清、血浆、全血,总RNA等建议总RNA起始量:5 μg,最低2.5 μg,浓度≥120 ng/μL 样本类型   1.Wu S, Li Y, Chen S, Liang S, Ren X, Guo W, Sun Q, Yang X. (2017) Effect of dietary Astragalus Polysaccharide supplements on testicular piRNA expression profiles of breeding cocks. International Journal of Biological Macromolecules 103(1), 957-964.2.Tritten L, Tam M, Vargas M, Jardim A, Stevenson MM, Keiser J, Geary TG. (2017) Excretory/secretory products from the gastrointestinal nematode Trichuris muris. Experimental Parasitology 178(1), 30-36.3.Sun J, Yao L, Chen T, Xi Q, Zhang Y. (2017) The effect of dietary ginseng polysaccharide supplementation on the immune responses involved in porcine milk-derived esRNAs. bioRxiv [Epub ahead of print].4.Ghorecha V, Zheng Y, Liu L, Sunkar R, Krishnayya NSR. (2017) MicroRNA dynamics in a wild and cultivated species of Convolvulaceae exposed to drought stress. Physiology and Molecular Biology of Plants 23(2), 291-300.5.Li H, Peng T, Wang Q, Wu Y, Chang J, Zhang M, Tang G, Li C. (2017) Development of Incompletely Fused Carpels in Maize Ovary Revealed by miRNA, Target Gene and Phytohormone Analysis. Frontiers in Plant Science 8(1), 463. 案例展示   同源四倍体和二倍体水稻花粉发育过程中的小RNA分析与比较 1.研究背景MicroRNAs (miRNAs)通过抑制其靶基因来调控植物基因的表达,且在植物生殖中起着重要的作用。然而,目前关于同源四倍体水稻miRNA组分析的研究是相当有限的。 2.研究结果在这项研究中,研究人员运用小RNA测序对二倍体和多倍体水稻花粉发育过程中的miRNA组进行分析。研究结果表明,与二倍体水稻相比,四倍体水稻中共检测出172种差异表达的miRNAs(DEM),以及57种miRNA在同源四倍体水稻中特异性表达。在这172种DEM中,115种miRNA上调,61种miRNA下调。上调DEM的靶基因GO分析表明,它们的功能富集在减数分裂前间期的膜运输、减数分裂繁殖和单小孢子阶段的核苷酸结合。 osa-miR5788和osa-miR1432-5p_R+1在减数分裂时上调,它们的靶基因揭示了减数分裂相关基因的相互作用,也暗示了它们可能参与染色体行为相关的基因调控。此外,在同源四倍体水稻的花粉发育过程中,发现了丰富的与转座因子相关的24 nt 的siRNA;但是,它们在二倍体水稻中的含量明显下降,表明24 nt的siRNA在花粉发育中可能发挥作用。  图 花粉发育过程中不同阶段miRNA表达的Venn图分析 本研究的结果为miRNA在同源四倍体水稻花粉发育过程中所起的作用,以及其与花粉不育性之间的关系提供了新的见解,为理解小RNA表达谱对多倍体的影响奠定了基础。 参考文献   Li, et al. (2016) Comparative Small RNA Analysis of Pollen Development in Autotetraploid and Diploid Rice. InternationalJournal of Molecular Sciences. 17, 499; doi:10.3390/ijms17040499 结果展示   1.差异miRNA上下调统计分析差异基因上下调频数统计用于判断不同实验条件下差异表达miRNA的个数。其中横坐标表示比较组信息,纵坐标表示上下调miRNA的数目,红色代表上调miRNA,蓝色代表下调miRNA,其中数字代表上下调miRNA的数目。   2.差异miRNA聚类分析差异miRNA聚类分析用于判断miRNA在不同实验条件下调控的聚类模式。根据样品miRNA表达谱的相近程度,将miRNA进行聚类分析,直观地展示miRNA在不同样品(或是不同处理)中的表达情况,由此获取生物学相关信息。不同的颜色表示不同的miRNA表达水平,颜色由蓝色经由白色至红色表示表达量从低到高。红色表示高表达基因,深蓝色表示低表达基因。  3.差异miRNA韦恩图通过不同比较组之间差异基因韦恩图可以直观地显示出不同比较组之间共同的和特有的差异表达miRNA的个数,差异基因韦恩图具有明显的生物学意义,比如是相同对照不同处理的实验设计情况,可以将不同处理下的差异基因进行比较。  4.GO富集性柱状图miRNA靶基因的GO富集柱状图:用于反映在生物过程(biological process)、细胞组分(cellular component)和分子功能(molecular function)富集的GO term上差异基因的个数分布情况。  5.GO富集性散点图对差异miRNA进行GO富集分析并以散点图展示,Rich factor表示位于该GO的差异基因个数/位于该GO的总基因数,P值越小,GO富集程度越高。 常见问题   1.miRNA命名规则是怎样的?关于miRNA命名,是根据miRBase的命名规则:物种拉丁名3字母缩写-miR/MIR-编号(植物),miR表示的是microRNA成熟体,植物的前体使用MIR。参见miRBase官网:目前已经不再使用*来标记microRNA与其发夹前体互补配对位置的互补序列,而是使用“-3p”与“-5p”作为区分这两条序列的后缀替代旧的的命名法。具体参考17.0版本出来时,miRbase数据库的blog文章:http://www.mirbase.org/blog/2011/04/mirbase-17-released/ 2.如何筛选差异基因?可以在筛选的时候可能需要参考该参数,一般如果专注于发现,那么全部保留,如果专注于差异表达,可以仅保留high和middle拷贝的。log2(Treat/Control)>0表示上调,1表示上调2倍,0表示上调,1表示上调2倍,

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iTRAQ蛋白质组定量

iTRAQ ( Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation) 技术是ABI公司推出的一项新的体外同位素标记技术。使用该技术可以对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂的混合体系中的所有蛋白质进行精确定量和鉴定。寻找差异表达蛋白,并揭示其细胞生理病理功能。联川生物依托先进的蛋白质谱分析平台、强大的信息分析和数据处理能力,为用户提供高效的蛋白质组鉴定与定量分析服务。 技术优势   通量高:一次实验即可对数千种蛋白进行定量分析,并且最多可同时对8份样本进行定量分析,通量远胜于传统的双向电泳。结果可靠:蛋白分析的灵敏度,特异性及重复性远高于双向电泳,并且定性与定量分析同步完成,确定结果准确性定性。覆盖广泛:鉴定与定量分析样本中表达的所有已知蛋白,包括高分子量蛋白、酸碱性蛋白、膜蛋白和不溶性蛋白等。支持关联分析:综合上游转录组等实验数据,提供多组学关联分析。 技术路线 蛋白质样品提取 iTRAQ标记 液相色谱分离 LC-MS/MS 信息分析 分析内容 1.数据产出统计与质控2.蛋白质鉴定分析3.蛋白质定量分析4.蛋白质GO分析5.蛋白质Pathway通路分析6.蛋白质COG分析7.差异蛋白的GO富集分析8.差异蛋白的Pathway通路富集分析9.差异蛋白的COG富集分析 样本类型   细胞,组织,尿液,全血,血清,血浆,总蛋白等建议总蛋白起始量(单次):≥ 500 μg,浓度≥1μg/μL 代表性文章   1.Wang L,et al. Proteome profiling reveals immune responses in Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) infected with Edwardsiella tarda by iTRAQ analysis. Fish Shellfish Immunol. 2017 Jul;66:325-333. doi: 10.1016/j.fsi.2017.05.0222.Zhang G, Zhang J, Wen X, et al. Comparative iTRAQ-based quantitative proteomic analysis of Pelteobagrus vachelli liver against acute hypoxia: Implications in metabolic responses.[J]. Proteomics, 2017.3.Li R, Yu H, Yue Y, et al. Combined proteomics and transcriptomics identifies sting-related toxins of jellyfish Cyanea nozakii.[J]. Journal of Proteomics, 2016, 148:57.4.Lv LX, et al.(2016) Integrated transcriptomic and proteomic analysis of the bile stress response in probiotic Lactobacillus salivarius LI01. Journal of Proteomics. doi.org/10.1016/j.jprot.2016.08.0215.Lv LX, et al.(2016) Integrated transcriptomic and proteomic analysis of the bile stress response in probiotic Lactobacillus salivarius LI01. Journal of Proteomics. doi.org/10.1016/j.jprot.2016.08.0216.Wang C, Liu C, Wei L, Shi L, Pan Z, Mao L, Wan X, Ping Z, Jiang T, Chen Z. (2016) A Group of Novel Serum Diagnostic Biomarkers for Multidrug-Resistant Tuberculosis by iTRAQ-2D LC-MS/MS and Solexa Sequencing. International Journal of Biological Sciences 12(2), 246-256.7.Cui Y, et al. (2016) Transcriptomic/proteomic identification of allergens in the mite Tyrophagus putrescentiae. Allergy.DOI:10.1111/all.129998.Cao JY, et al. (2016) TMT-based quantitative proteomics analyses reveal novel defense mechanisms of Brassica napus against the devastating necrotrophic pathogen Sclerotinia sclerotiorum. J Proteomics. doi: 10.1016/j.jprot 结果展示 KEGG注释根据KEGG注释总表,可以对注释到KEGG的差异蛋白总体情况进行Unigene数目的统计。 KOG/COG注释COG(Clusters of Orthologous Groups of proteins),即同源蛋白簇。一般原核 生物用COG,真核生物用KOG。COG注释作用:1. 通过已知蛋白对未知序列进行功能注释;2. 通过查看指定的COG编号对应的protein数目,存在及缺失,从而能推导特定的代谢途径是否存在; 3. 每个COG编号是一类蛋白,将query序列和比对上的COG编号的proteins 进行多序列比对,能确定保守位点,分析其进化关系。  GO富集分析GO分为三个功能:生物进程(biological process) 细胞组成(cellular component)分子功能(molecular function)。一般进行分析时,会 取前50个差异较为明显的蛋白绘制GO注释图。分别对应这三个功能的差 异蛋白数量为25个,15个以及10个。 蛋白质network网络构建蛋白与蛋白的互作关系一般用String软件绘制,String可以用来查找蛋白间的作用关系及作用强度,同时也可以查看单个蛋白与其他相关联的上下游关系,可以为老师研究蛋白互作关系提供思路 。 案例展示   转录组及蛋白质组学技术分析益生菌唾液乳杆菌LI01的胆汁应激反应 研究背景   最近发现几种唾液乳杆菌菌株,表现出良好的益生菌性质,如抗菌活性,炎症调节,甚至是肿瘤性病变减少等。从健康人体内分离的唾液乳杆菌LI01已经在预防和治疗肝衰竭中表现出了益生菌性质。对胆汁的耐受对于乳杆菌在胃肠道中的存活和发挥其益处至关重要。 研究结果   通过转录组测序和iTRAQ蛋白质组定量分析后发现,与空白对照相比,添加ox胆汁溶液培养的LI01菌株中检测到591个差异表达的基因和347个差异表达的蛋白质。利用GO和KEGG分析,发现差异表达的基因主要参与胁迫应答,糖酵解和转运以及诸如碳水化合物代谢和氨基酸生物合成等途径;差异表达的蛋白质主要参与DNA修饰、基因 表达和细胞组分降解和代谢过程的调节。 图 差异表达基因及差异表达蛋白质的KEGG富集分析  研究还发现,LI01的胆汁耐受能力是基于高度重塑的细胞包膜以及增强的胆汁外排系统,而不是基于胆盐水解酶的活性。一些差异表达的基因是与调节系统即应激反应和中枢代谢过程相关的基因,也在胆汁诱导的损伤预防和能量效率中起作用。此外,胆汁盐似乎增强了LI01的蛋白水解和氨基酸摄取(特别是芳香族氨基酸)能力,这个结果表明该菌株具有肝保护的性质。总而言之,本研究的开展建立了唾液乳杆菌LI01中胆汁应激的全局反应机制的模型。  参考文献   Lv LX, et al.(2016) Integrated transcriptomic and proteomic analysis of the bile stress response in probiotic Lactobacillus salivarius LI01.Journal of Proteomics. doi.org/10.1016/j.jprot.2016.08.021   常见问题 1.iTRAQ能否鉴定新蛋白??iTRAQ不能鉴定新蛋白,只能做定量。定量的基本原理是根据肽段上报告基团信号的强弱来计算,不涉及内参蛋白。同时,不能做未知蛋白鉴定。iTRAQ产品的分析都是基于对数据库的筛查,所以必须是序列已知的蛋白才可以检测到。2.iTRAQ蛋白定量能鉴定多少个蛋白,为什么有些物种鉴定到蛋白那么少?对于可鉴定蛋白的数量确实因物种有差异,原因是鉴定蛋白是通过筛查蛋白质数据库来进行的,如果某个物种没有很好的基因组注释信息或转录组注释信息,筛查得到的信息也会很少。尤其是植物类、昆虫类、水产品类非模式物种,往往只能鉴定不到1k个蛋白。3.蛋白鉴定是不是一定要依赖于数据库?是的,所有蛋白产品里的蛋白鉴定,都是需要依赖数据库的。数据库信息的完整性,将对蛋白鉴定的结果产生一定影响。4.iTRAQ结果的后期验证?一般选择注释结果与所关注的生物过程紧密相关的蛋白或者差异显著的蛋白来做后期验证。iTRAQ的后期验证,通常采用western blot。而植物中,可用抗体较少,通常的处理方式是不验证或是自行制备多抗进行验证;亦可进行mRNA的定量qPCR验证,找mRNA和蛋白的关联。两种方式都已有文章发表。

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单细胞测序

单细胞测序技术,是在单个细胞水平上对基因组、转录组、表观组进行高通量测序分析的一项新技术。它能够揭示单个细胞的基因结构和基因表达状态,反映细胞间的异质性,在肿瘤、发育生物学、微生物学、神经科学等领域发挥重要作用,正成为生命科学研究的焦点。 单细胞测序工作流程  单细胞测序的工作流程包括 4 个关键步骤 :1) 单细胞制备,2)单细胞分离和文库制备,3)测序和初级分析,4)数据可视化与解读。在整个工作流程中,有一些影响结果并决定研究能否成功的实验注意事项和关键步骤。想要获得准确的数据,得出有意义的结论,需要精心设计实验,并按要求开展实验。 在过去的十年中,随着细胞分离新技测序新方法术和单细胞和新应用的发展,单细胞鉴定和研究领域取得了重大进展。随着单细胞分离和检测的选项越来越多,实验方案的多样性显著增加,每种方案都有其固有的优缺点。因此,研究人员面临着诸多决策问题,例如细胞通量、测序深度、所需转录本长度、是否应纳入表观遗传或蛋白水平测量等。 想要充分利用单细胞测序来阐明复杂的生物系统,精心设计实验和优化工作流程的每个步骤至关重要。研究人员必须有明确的生物学目标和合理的实验设计,才能选择出针对其研究问题的最佳方法。

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慢病毒载体

慢病毒载体(Lentivirus)是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体,是逆转录病毒的一种,基因组是RNA,其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒可将外源基因整合到基因组中实现稳定表达,具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。   慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小RNA干扰作用持续且稳定,并随细胞基因组的分裂而分裂(图1)。   图1 慢病毒包装和侵染细胞的过程   慢病毒载体具有宿主范围广,免疫原性低,基因容量大,可以长期表达等特点。能够有效地感染培养的肿瘤细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。   慢病毒的感染具有整合特性,能够将外源基因有效地整合到宿主染色体上,达到持久性表达,因而可构建稳定细胞株,用于基因的细胞功能研究。借助慢病毒载体改造T细胞可用于CAR-T细胞治疗。 慢病毒包装与纯化     慢病毒包装采用三质粒或四质粒系统进行包装,收集细胞培养上清,通过超速离心浓缩纯化和收集病毒。 慢病毒滴度检测     检测方法:定量PCR检测感染后细胞基因组中外源DNA拷贝数   实验原理:慢病毒介导外源基因以逆转录方式整合进目的细胞基因组 慢病毒载体优势   ① 表达时间长:慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上,实现基因长时间稳定的表达,不随细胞分裂传代而丢失,是细胞实验的首选,常用于构建稳定株。② 安全性高:未发现致病性,慢病毒载体改造T细胞用于CAR-T细胞治疗。③ 免疫原性低:直接注射活体组织不易造成免疫反应,适用于动物实验。 不同病毒的生物学特性比较 载体选择  和元生物拥有丰富的慢病毒产品,用于操作编码基因和非编码基因,如lncRNA、microRNA、circRNA,如下慢病毒载体可供您选择(不限于此列表): 调控方式 载体编号 载体名称(载体元件顺序) 真核抗性 荧光 启动子 默认标签 载体容量    过表达 GL127 pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-WPRE N/A EGFP CMV 3FLAG 4.8kb GL121 pSLenti-EF1-EGFP-CMV-MCS-WPRE N/A EGFP CMV N/A 4.4kb GL129 pSLenti-CMV-mCherry-3xFLAG-WPRE N/A mCherry CMV 3FLAG 4.8kb GL119 pSLenti-CMV-MCS-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE Puro N/A CMV 3FLAG 4.4kb GL120 pSLenti-SFH-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE Puro EGFP CMV 3FLAG 3.5kb GL107 pSLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE Puro EGFP CMV 3FLAG 3.7kb GL109 pSLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE Puro EGFP CMV N/A 3.8kb GL122 pSLenti-EF1-EGFP-F2A-BSR-CMV-MCS-WPRE blasticidin EGFP CMV N/A 3.9kb GL130 pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE Puro EGFP CMV 3FLAG 3.7kb GL132 pSLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-WPRE2-CMV-MCS Puro EGFP CMV N/A 3.7kb GL123 pSLenti-EF1-mCherry-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE Puro mCherry CMV 3FLAG 3.7kb GL125 pSLenti-CMV-mCherry-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE Puro mCherry CMV 3FLAG 3.7kb GL133 pSLenti-EF1-mCherry-F2A-Puro-WPRE2-CMV-MCS Puro mCherry CMV N/A 3.7kb H114 pLenti-CMV-Luc2-IRES-Puro-WPRE Puro N/A CMV N/A 2.2kb GL124 pSLenti-EF1-Luc2-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE Puro N/A CMV N/A 2.8kb  表达cre H126 pLenti-CMV-NLS-Cre-3xFLAG-WPRE N/A N/A CMV 3FLAG 3.9kb H15108 pLenti-CMV-DIO-MCS-WPRE N/A N/A CMV 3FLAG 5.3kb 三标 H7656 pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-mNeonGreen-F2A-Puro-WPRE Puro mNeonGreen CBh 3FLAG 1.3kb H7657 pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-tdTomato-F2A-Puro-WPRE Puro tdTomato CBh 3FLAG 0.6kb H9911 pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-mNeonGreen-F2A-BSR-WPRE blasticidin mNeonGreen CBh 3FLAG 1.5kb H9912 pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-tdTomato-F2A-BSR-WPRE blasticidin tdTomato CBh 3FLAG 0.8kb circRNA过表达 H8384 pLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-S-circRNA-WPRE N/A EGFP CMV N/A 3.0kb H8807 pLenti-CMV-S-circRNA-WPRE N/A N/A CMV N/A 4.8kb H8399 pLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-L-circRNA-WPRE Puro EGFP CMV N/A 1.0kb H8810 pLenti-CMV-L-circRNA-WPRE N/A N/A CMV N/A 2.8kb miRNA过表达 GL109 pSLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE Puro EGFP CMV N/A N/A H3919 pCLenti-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE Puro EGFP U6 N/A N/A H119 pLenti-CMV-TurboGFP-IRES-Puro-miR30(miRNA)-WPRE Puro TurboGFP CMV N/A N/A H3928 pCLenti-U6-miR30(miRNA)-CMV-mCherry-F2A-Puro-WPRE Puro mCherry U6 N/A N/A H146 pCLenti-EF1-Puro-CMV-EGFP-3xFLAG-Sponge(miRNA)-WPRE Puro EGFP CMV 3FLAG N/A H7505 pCLenti-U6-TuD(miRNA)-CMV-EGFP-F2A-BSR-WPRE blasticidin EGFP CMV N/A N/A H7506 pCLenti-U6-TuD(miRNA)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE Puro EGFP CMV N/A N/A 过表达(Tet-on) H125 pLenti-TRE-EGFP-EF1-rtTA3-IRES-Puro-WPRE Puro EGFP TRE N/A 2.0kb H121 pLenti-TRE-EGFP-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE Puro EGFP TRE 3FLAG 3.3kb H2057 pLenti-EF1-rtTA3-IRES-Puro-WPRE Puro N/A EF1 N/A N/A shRNA干扰 GL401 pCLenti-U6-shRNA-CMV-Puro-WPRE Puro N/A U6 N/A N/A GL404 pCLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-WPRE N/A EGFP U6 N/A N/A GL427 pSLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE Puro EGFP U6 N/A N/A GL428 pSLenti-U6-shRNA-CMV-mCherry-F2A-Puro-WPRE Puro mCherry U6 N/A N/A H7615 pCLenti-U6-shRNA-CMV-mCherry-F2A-BSR-WPRE blasticidin mCherry U7 N/A N/A CRISPR敲除 H5070 pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE Puro N/A U6 N/A N/A H7072 pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-BSR-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE blasticidin N/A U6 N/A N/A H6825 pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE N/A sfGFP U6 N/A N/A H5068 pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE N/A EGFP U7 N/A N/A H5450 pLenti-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-espCas9_1.1-WPRE Puro N/A CMV 3FLAG N/A CRISPRa转录激活 H9517 pCLenti-U6-gRNA-MS2-EFS-dCas9-VP64-T2A-BSD-WPRE blasticidin N/A U6 N/A N/A E2577 pCLenti-EF1a-MCP-P65-HSF1-T2A-Hygro-WPRE hygromycin N/A EF1a N/A N/A H7284 pCLenti-U6-gRNA-2x(wt+f6)MS2-CMV-MCP-P65-HSF1-IRES-BSR-WPRE blasticidin N/A U6/CMV N/A N/A H7281 pLenti-CMV-dCas9-VP64-T2A-Puro-WPRE Puro N/A CMV N/A N/A 常规应用       体外感染细胞      慢病毒载体能够有效地感染培养的肿瘤细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元、内皮细胞、干细胞等多种类型原代细胞和大部分细胞系。      慢病毒的感染具有整合特性,能够将外源基因有效地整合到宿主染色体上,因而可以达到持久性表达,从而构建稳转细胞株,体外进行细胞功能学实验,包括细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡等研究。稳定表达目的基因的肿瘤细胞株还可以进一步构建肿瘤动物模型,进行体内基因功能验证,药效药代,活体成像等检测,进一步研究体内肿瘤发生、发展和转移及药物治疗的效果。   常见MOI列表 细胞名 中文名称 慢病毒感染MOI(参考值) MGC80-3 人胃癌细胞 10 HT-29 人结肠癌细胞 20 RKO 人结肠腺癌细胞 10 Caki-1 人肾透明细胞癌皮肤转移细胞 10 5637 人膀胱癌细胞 10 U-118 MG 人脑星形胶质母细胞瘤 10 RWPE-1 人正常前列腺上皮细胞 20 HeLa 人宫颈癌细胞 10~20 Ca Ski 人宫颈癌肠转移细胞 10 MCF7 [MCF-7] 人乳腺癌细胞 10 A549 人非小细胞肺癌细胞 10 NCI-H1299 人非小细胞肺癌细胞 20 U-87 MG 人脑星形胶质母细胞瘤 10 U251 人胶质瘤细胞 10 A172 人胶质母细胞瘤细胞 10 K-562 人慢性髓原白血病细胞 10 HL-60 人原髓细胞白血病细胞 10 GES-1 人胃上皮细胞 20 U266 人骨髓瘤细胞 20 CAL 27 人舌鳞癌细胞 20 PC9 人肺癌细胞 5 PC14 人肺癌细胞 10 MADB-106 大鼠乳腺癌细胞 20 F98 大鼠脑胶质瘤细胞 20 MHCC-97H 人肝癌细胞(高转移) 10~20    MOI 是multiplicity of infection 的缩写,即感染复数,其含义是感染时病毒与细胞的数量比值,一般以实验中某个细胞,感染达到80%,定义为这个细胞的MOI值,即病毒量与细胞数的比值;加的病毒量(μl)=细胞数×MOI/滴度(…/ml) ×1000 慢病毒在肿瘤研究中的应用案例 1.Nature Communications. (IF=12.353). Shi Y,et.al. (2017). Tumour-associated macrophages secrete pleiotrophin to promote PTPRZ1 signalling in glioblastoma stem cells for tumour growth.[慢病毒, 胶质细胞瘤]慢病毒干扰: Lenti-shNT/shPTN/shPTPRZ1 2. Hepatology. (IF=14.079). Ma JZ,et.al. (2016). METTL14 suppresses the metastatic potential of HCC by modulating m6 A-dependent primary miRNA processing. [慢病毒, 肝癌]慢病毒过表达/干扰:pLV-CMV-PGK-EGFP-T2A-puro/ pLV-U6-shRNA-CMV-EGFP-T2A-puro  慢病毒在神经系统的应用(在体注射)1.Nature Neuroscience. (IF=19.912). Ding XL,et.al. (2017). Activity-induced histone modifications govern Neurexin-1 mRNA splicing and memory preservation. [慢病毒, 学习与记忆] 病毒类型:慢病毒载体名称:LV-Suv39h1-RNAi(不确定详细的)注射部位:海马DG区病毒注射量:2 μL,9.98 × 108 TU/mL检测时间:2周 2.Nature Communications. (IF=12.353). Yao XH,et.al. (2016). Electrical coupling regulates layer 1 interneuron microcircuit formation in the neocortex. [慢病毒, 神经环路] 病毒类型:慢病毒载体名称:LV- CX36-shRNA-EGFP(不确定详细的)注射部位:P1小鼠新皮层L1病毒注射量:1μL检测时间:2周3.Molecular Psychiatry. (IF=11.64). Guo DJ,et.al. (2019). Autism-like social deficit generated by Dock4 deficiency is rescued by restoration of Rac1 activity and NMDA receptor function. [慢病毒, 自闭症]  病毒类型:慢病毒载体名称:Lenti-CMV-EGFP-P2A-3FLAG-Rac1注射部位:小鼠海马CA1区病毒注射量:1μL检测时间:4周 慢病毒延伸服务  和元生物慢病毒的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程,采用三质粒或四质粒系统在293T细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速离心纯化,并通过qPCR对病毒基因拷贝进行滴定。一般情况下我们的慢病毒的滴度在108~109TU/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。

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基因过表达

基因功能研究中通常需要上调目的基因的表达来观察表型的变化。过表达是将目的基因在宿主细胞大量表达的过程,其基本原理是将目的基因构建到工具载体上,导入细胞使基因实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。工具载体通常包括原核表达载体、普通真核表达载体、慢病毒载体、腺相关病毒载体、腺病毒载体和逆转录病毒载体等。 工具载体介绍 根据实验需要不同,目的基因大小等选择不同的载体,包括真核表达载体和病毒载体等均可以实现编码基因和非编码基因的过表达。 表达系统 真核表达载体 慢病毒载体 重组腺相关病毒载体 重组腺病毒载体 载体基因特性 双链DNA质粒 RNA逆转录病毒 单链DNA病毒 双链DNA病毒 外源基因表达时间 24h开始表达,持续3-7天 2-4天开始表达,长时间稳定表达 7-14天开始表达 1-2天开始表达 插入片段大小 8kb左右 4kb左右 2.8kb左右 4kb左右 稳定细胞株筛选 难操作 可以 不可以 不可以,瞬时表达 细胞实验 细胞系,部分转染效率低 首选,广谱,感染效率高 细胞系,部分血清型转染效率低 广谱,感染效率高 动物实验 不适合 适合,根据观察时间和注射部位 首选,根据观察时间和注射部位 免疫原性高,慎选 滴度范围 无 108~109TU/ml 1012-1013VG/ml 1010-1011PFU/ml 载体图谱中常见元件介绍 元件名称 类型 用途 启动子 CMV、CAG、EF1a、U6等 广谱或特异启动目的基因的表达 hSyn、CaMKIIα等 特异性启动子,在特定的组织细胞中启动目的基因的表达 蛋白标签 3xFLAG、HA 、6xHis、Myc等 与目的基因融合表达,常用于检测外源蛋白表达水平 荧光标记 EGFP、mCherry、mNeonGreen等 可与目的基因融合或非融合表达用于检测转染、感染效果 抗性基因 Puro、Neo、Hygro、BSD等 真核抗性,常用于稳定株筛选 Amp、Kan 原核抗性,常用于原核细菌培养,质粒扩增 连接元件 Linker 用于连接两个基因,融合表达时常用,可降低因融合表达对蛋白折叠和功能的影响 IRES、2A 用于连接两个基因,达到非融合表达的效果 其它元件 WPRE 增加目的基因的表达 载体选择(部分) 病毒载体的选择,根据实验的需求参考慢病毒、腺相关病毒、腺病毒、逆转录病毒等。 载体类别 编号 载体元件 慢病毒过表达 GL127 pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-WPRE GL121 pSLenti-EF1-EGFP-CMV-MCS-WPRE GL107 pSLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE GL122 pSLenti-EF1-EGFP-F2A-BSR-CMV-MCS-WPRE GL124 pSLenti-EF1-Luc2-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE 腺病毒过表达 H225  pADV-mCMV-MCS-3xFLAG H201 pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG H213 pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP H204 pADV-mCMV-mCherry-HA 腺相关病毒过表达 AOV024 pAAV-CMV-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE AOV025 pAAV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE AOV064 pAAV-hSyn-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE AOV065 AAV-hSyn-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE H9429 pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA H9525 pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA H10881 pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA H10886 pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA 服务简介 根据客户提供的基因信息,从生物信息学网站上调出该基因的cDNA序列,将cDNA序列构建到工具载体中,根据实验需求过表达编码基因或者非编码基因。针对病毒载体,包装生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。 病毒载体服务流程

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稳定细胞株构建

外源基因在细胞中的表达可分为两大类,一类是瞬时表达,外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,虽然可以达到高水平的表达,但通常只持续几天;一类是稳定表达(构建稳转株),外源DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因。    建立稳定细胞株,基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),筛选得到可稳定表达目的蛋白、或稳定沉默特定基因的细胞株。 筛选方法 慢病毒感染筛选稳定细胞株利用慢病毒整合表达特性来筛选稳定细胞株,该方法克服了传统质粒挑单克隆方法周期久的弊端,可以在短时间内高效获取稳定细胞株。利用慢病毒制备稳定株优势(1)细胞适用种类广泛,可用于各种哺乳动物细胞;(2)构建稳转株时间短,表达持续时间长;(3)多种荧光标记和抗性基因可选,满足观测实验要求。 稳定细胞株分类   混合克隆稳定细胞株   混合克隆细胞系是基因转染后直接用抗药筛选得到的,筛选出的细胞都表达抗性基因和目的基因,但包含了各种不同的细胞克隆。不同克隆的目的基因整合位置和表达量均有所不同。   混合克隆细胞株筛选比较快速,费用较低。在需要构建的细胞株转染效率高,目的基因表达效率高的情况下,单克隆细胞株最后得到的表达效果和混合克隆细胞株并没有显著差异,这时多克隆细胞筛选是理想的选择。   单克隆稳定细胞株   单克隆细胞系是由含有稳定整合外源片段的单个细胞的扩增得到的细胞株,每个细胞的目的基因整合位置的表达量均高度一致,但可能丢失一些表型。单克隆细胞株筛选周期长,费用高。需要进行细胞亚定位实验的细胞系,难感染的和表达率低的通常建议进行单克隆细胞筛选。 服务流程 已构建的稳定株列表(部分) 中文名称 对应稳定株 对应培养条件 细胞来源 人脑星形胶质母细胞瘤 U-87 MG-luc-mNeonGreen-Puro MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人胶质瘤细胞 U251-CMV-EGFP-Puro DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人膀胱移行细胞癌细胞 T24-EGFP-Puro RPMI-1640+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人胰腺癌细胞系 SW 1990-EGFP-Puro L-15+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人神经母细胞瘤细胞 SK-N-SH-EGFP-Puro MEM+10%FBS+0.4ug/ml Puromycin 中科院 人乳腺癌细胞 SK-BR-3-EGFP-Puro DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人子宫颈鳞癌细胞 SiHa-CMV-EGFP-Puro DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 小鼠脑神经瘤细胞 Neuro-2a-EGFP-Puro MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 小鼠脑神经瘤细胞 Neuro-2a-CMV-Puro MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人乳腺癌细胞 MDA-MB-468-EGFP-Puro L-15+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人乳腺癌细胞 MDA-MB-231-CMV-EGFP-Luc-Puro L-15+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人乳腺癌细胞 MCF7-CMV-EGFP-Puro MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 小鼠肺癌细胞 LLC-CMV-sfGFP-Luc-Puro DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人慢性髓原白血病细胞 K-562-CMV-EGFP-Puro RPMI-1640+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人T淋巴细胞白血病细胞 Jurkat-CMV-EGFP-Puro RPMI-1640+10%FBS+0.5ug/ml Puromycin 中科院 人子宫内膜癌细胞 ishikawa-CMV-Puro RPMI-1640+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人肝癌细胞 HuH-7-CMV-sfGFP-Luc-Puro DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人肝癌细胞 HuH-7-Luc Puro DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人结肠癌细胞 HT-29-EGFP-Puro McCoy’s 5A+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人肝癌细胞 Hep G2-CMV-EGFP-Luc-Puro DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人肝癌细胞 Hep G2-CMV-Puro DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人宫颈癌细胞 HeLa-EGFP-Puro DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人宫颈癌细胞 HeLa-RFP-Puro DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人结肠癌细胞 HCT 116-CMV-EGFP-Luc-Puro McCoy’s 5A+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人咽鳞癌细胞 FaDu-CMV-EGFP-Puro MEM+10%FBS+1ug/ml Puromycin 中科院 小鼠结肠癌细胞 CT26.WT-CMV-Luc-Puro RPMI-1640+10%FBS+8ug/ml Puromycin 中科院 小鼠结肠癌细胞 CT26.WT-CMV-Puro RPMI-1640+10%FBS+8ug/ml Puromycin 中科院 人肾透明细胞癌皮肤转移细胞 Caki-1-EGFP-Puro DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 仓鼠肾成纤维细胞 BHK-21 [C-13]-CMV-Puro MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人甲状腺乳头状癌细胞 B-CPAP-CMV-EGFP-Puro RPMI-1640+10%FBS+1%NEAA+2ug/ml Puromycin 中科院 小鼠黑色素瘤细胞 B16-CMV-Puro RPMI-1640+10%FBS+1ug/ml Puromycin 中科院 小鼠黑色素瘤细胞 B16-CMV-EGFP-Puro RPMI-1640+10%FBS+1ug/ml Puromycin 中科院 人非小细胞肺癌细胞 A549-CMV-EGFP-Puro F12K+10% FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人非小细胞肺癌细胞 A549-luc-mNeonGreen-Puro F12K+10% FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 小鼠乳腺癌细胞 4T1-CMV-Luc-Puro RPMI-1640+10%FBS+1ug/ml Puromycin 中科院 小鼠乳腺癌细胞 4T1-CMV-EGFP-Puro RPMI-1640+10%FBS+1ug/ml Puromycin 中科院 人胃癌细胞 MKN-45-CBh-luc2-mNeonGreenA-Puro RPMI-1640+20%FBS+2ug/ml Puromycin 协和 人肺腺癌细胞 NCI-H1975-CBh-luc2-mNeonGreenA-Puro RPMI-1640+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院 人结肠癌细胞 HCT116-CBh-luc2-mNeonGreenA-Puro McCoy’s 5A+10%FBS+2ug/ml Puromycin 中科院

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动物实验

和元生物动物实验部成立于2014年,拥有国内先进的小动物SPF级动物房,设有实验动物管理委员会(IACUC),具有上海科委颁发的SPF级大、小鼠的《实验动物使用许可证》SYXK(沪)2017-0003。SPF区域使用面积为350m2,可同时容纳饲养大、小鼠5000余只,为客户同时提供约50-100批动物实验项目服务。动物房屏障内全部设有独立通气式动物IVC及自动压差调节系统,温湿度实时监控系统,人、动物、物品分离并单向流动路线,严格保障屏障内环境。 和元生物动物实验部所有实验操作人员均接受过严格的培训管理,具备相应岗位资格证书。同时,动物房还配备专业的管理人员,严格保障屏障内环境的洁净度和动物的质量控制。 目前,和元生物可提供大小鼠饲养繁育鉴定、动物模型构建(包括肿瘤、神经系统、代谢疾病模型)、药理药效学评价、行为学及病理检测一站式服务,为各种疾病的机制研究和新药的开发提供良好的科研平台。 大小鼠扩繁服务:和元生物动物实验部可提供大小鼠饲养繁育鉴定服务。根据客户需求,提供最为专业的交配饲养方案,提高繁殖效率、节省饲养成本。 优势: · 舒适、洁净的饲养环境 · 严格的质量控制管理体系 · 高度重视动物福利,高品质SPF级大小鼠饲养 · 短时间一次性获得大量相同基因型子代小鼠

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肿瘤动物模型

肿瘤动物模型在肿瘤发生、发展、转移等基础研究以及药物研发治疗上扮演着至关重要角色,因此肿瘤的研究离不开动物模型的建立。科研中常用的肿瘤模型有以下几种:皮下成瘤、原位成瘤、尾静脉注射模型 皮下成瘤模型将肿瘤细胞(或肿瘤组织)直接接种在小鼠的皮下而建立的一种肿瘤动物模型。该肿瘤模型是一种用于临床前评估药物体内药效的简单而重要的工具,同时,在肿瘤的发病机制、药物作用的研究中亦起到重要作用。 皮下成瘤   该模型操作简单方便,可以直观观察肿瘤的生长,方便检测动物体重、肿瘤生长曲线、肿瘤重量等重要数据;原位移植模型原位移植指将肿瘤细胞或肿瘤组织块原位移植到免疫缺陷动物的组织器官内,使之产生肿瘤并形成自发性转移灶。其方法是将稀释好的肿瘤细胞直接接种到器官的浆膜下。或者先将肿瘤细胞皮下接种,达500-800mm3左右,瘤组织取出切成1-3mm3的小块,将准备好的癌组织块植入器官的浆膜下,缝合浆膜,这样也可以形成异种原位肿瘤。常用原位接种包括:脑、肝、肌肉、乳腺垫原位。                                     原位移植模型能更好的模拟肿瘤细胞在体内生长的微环境,模拟肿瘤生长甚至转移的过程。尾静脉注射肿瘤转移模型肿瘤细胞经尾静脉注射后,先通过肺部的毛细血管网进入动脉血液循环系统,可造成全身多发转移灶。但是由于肿瘤细胞较为粘稠易聚团,一般会被困在小鼠肺部微血管,主要形成肺转移,可能后期会造成远端器官的转移。主要用于建立肿瘤转移(血行通路)模型或血癌模型或者肿瘤肺转移。 尾静脉注射乳腺癌细胞 肿瘤转移是临床上肿瘤致死的最主要原因,然而肿瘤转移的机制和过程非常复杂,目前尚不完全清楚。建立转移模型,可以更好地模拟肿瘤在人身上的发生和发展过程,对药物筛选和开发的预测性更高。 和元上海动物实验平台可提供皮下成瘤、原位成瘤、尾静脉注射转移成瘤等多种肿瘤动物模型构建及病理切片、药效检测、小动物成像等服务。

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代谢类疾病动物模型

和元生物动物实验部可提供大小鼠肥胖、糖尿病、心血管系统疾病及炎症等多种代谢及循环系统疾病动物模型的构建服务。  1、肝损伤模型 肝脏疾病是发生在肝脏的所有疾病的总称。包括感染性疾病、肿瘤性疾病、血管性疾病、代谢性疾病、中毒性疾病、自身免疫性疾病、遗传性疾病、肝内胆管结石病等。感染性疾病又包括病毒感染、细菌感染、寄生虫感染等,如病毒性肝炎、肝包虫病等。肿瘤分为良性肿瘤和恶性肿瘤,如肝癌、肝血管瘤、肝脂肪瘤、肝肉瘤等。肝脏疾病动物模型的运用范围非常广。  四氯化碳诱导的肝损伤模型:通过腹腔注射不同剂量的四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤,检测小鼠血浆转氨酶水平的变化,建立的小鼠模型。 胆汁淤积型小鼠肝损伤模型:通过胆管结扎诱导胆汁淤积型小鼠肝损伤模型。   2、肾缺血再灌注损伤模型的建立 慢性肾功能衰竭(CRF)模型:大鼠5/6肾切除后残余存肾单位的血液动力学改变,引起残余肾单位的高滤过蛋白尿,导致以肾小球硬化为主要特点的CRF。   急性肾损伤(AKI)模型:AKI是涉及多学科的临床常见危重病,患病率在综合性医院为3%~10%,在重症监护室为30%~60%,其重症患者死亡率高达 30%~80%,存活患者约50%遗留永久性肾损伤,防治形势严峻。 建立稳定的AKI动物模型,是早期发现和早期防治等肾病研究的关键。   3、结肠炎模型 肠胃病的种类很多,包括:溃疡性结肠炎、慢性肠炎、胃出血和胃穿孔等,其中溃疡性结肠炎是当今的研究热点。构建稳定的溃疡性结肠炎动物模型,有利于研究和阐述目前病因不明确的溃疡性结肠炎发病机制和治疗药物开发。   DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎模型:造模七天后,小鼠结肠缩短、肠壁增厚、肠黏膜充血、局部出血、可见明显溃疡面,病变以盲肠和远段结肠为显著。HE染色结果,DSS组黏膜缺失,腺体多数不完整,炎症细胞广泛浸润,呈典型炎症改变。体重变化:2.5% DSS诱导的小鼠体重出现下降,小鼠食欲下降,活动欠佳。  4、关节炎模型 通过完全弗氏佐剂诱导关节炎大、小鼠模型。关节炎(arthritis)泛指发生在人体关节及其周围组织,由炎症、感染、退化、创伤或其他因素引起的炎性疾病,可分为数十种。   化合药物诱导型关节炎动物模型,造模方法具有简便易行,对动物影响小、操作简便省时等优点。造模成功后动物关节肿胀明显,其表现接近于人类关节炎症状,且造模过程简单,稳定,临床病理与免疫学改变类似于人类关节炎,是较为理想的关节炎动物模型。   5、心血管疾病模型 冠状动脉结扎致大、小鼠心肌缺血模型,包括急性心肌梗死、慢性心肌梗死、慢性心力衰竭及心肌缺血再灌注等药效试验服务项目,主要包括造模、药效试验、药效评价等。

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  公司前身为上海李记生物科技有限公司,成立于2015年。和元李记在2023年由和元生物(股票代码:688238)和李记生物合资成立。是集研发、生产、销售为一体的国产生物试剂公司,目前拥有多名复旦、交大、同济博士的研发团队,和一支年轻、专业敢拼的销售团队,以及在全国40余座城市铺设多名授权代理商体系。 李记生物试剂,铸造百年经典!我们将不断致力于生物实验试剂的创新研发、高质生产、贴心服务,为科研向前略尽绵薄之力!
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