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质粒构建

原文链接:和元生物——质粒构建

  和元生物科研服务平台可为基因功能研究者提供前沿、全面、严谨的载体设计和载体构建服务,内容涵盖普通真核表达载体、病毒载体等。

  病毒载体构建服务包含慢病毒、腺相关病毒、腺病毒和逆转录病毒载体等,构建内容包括基因过表达载体构建、基因定点突变表达载体构建、用于基因沉默的shRNA设计与构建、microRNA表达与封闭载体设计与构建、萤光素酶报告基因载体构建(UTR、启动子及其它功能序列)以及Cre-LoxP系统和CRISPR/Cas9基因编辑工具载体设计与构建等,力求一站式解决基因功能研究中的基因上调和基因下调需求。

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  质粒优势:

  ①表达时间快,导入细胞后约24小时可观察到目的基因表达;

  ②构建技术简单,成本低。

  ③和元的过表达载体库丰富,并且过表达的标记丰富

  荧光标记:GFP、mCherry、CFP、BFP、EYFP、mNeonGreen、tdTomato、 mScarlet…

  标签标记: FLAG、 HA 、Myc、His tag…

  抗性标记:Puro、Neo、Hygro、BSD…

  局限性:

  ①转染试剂具有细胞毒性,使用后影响细胞状态;

  ②大部分细胞较难转染,达不到基因操作目的;

  ③质粒不整合到细胞基因组,只能进行短时间的瞬时表达,无法进行观察周期较长的实验。

  由于单纯质粒存在一定的局限性,根据实验需要需包成病毒进一步满足不同实验的需求。

  不同表达载体的区别

表达系统

真核表达载体

慢病毒载体

重组腺相关病毒载体

重组腺病毒载体

载体基因特性

双链DNA质粒

RNA逆转录病毒

单链DNA病毒

双链DNA病毒

外源基因表达时间

24h开始表达,持续3-7天

2-4天开始表达,长时间稳定表达

7-14天开始表达

1-2天开始表达

插入片段大小

8kb左右

4kb左右

2.8kb左右

6kb左右

稳定细胞株筛选

难操作

可以

不可以

不可以,瞬时表达

细胞实验

细胞系,部分转染效率低

首选,广谱,感染效率高

不适合

广谱,感染效率高

动物实验

不适合

适合,根据观察时间和注射部位

首选,根据观察时间和注射部位

免疫原性高,慎选

滴度范围

108~109TU/ml

1012-1013vg/ml

1010-1011pfu/ml


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