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原文链接：和元生物——CRISPR/Cas9
CRISPR/Cas9 是一种能够对基因组的特定位点进行精确编辑的技术。其原理是核酸内切酶Cas9蛋白通过导向性RNA（guide RNA, gRNA）识别特定基因组位点并对双链DNA进行切割，造成DNA双链断裂，细胞利用非同源末端连接(Non homologous End Joining，NHEJ）或者同源重组（Homologous Recombination, HR）方式对切割位点进行修复，实现DNA水平基因敲除或精确编辑。
CRISPR/Cas9系统主要由两部分组成：
1. 单链的guide RNA（single-guide RNA，sgRNA）
2. 有核酸内切酶活性的Cas9 蛋白
CRISPR基因敲除
以基因敲除为目的时，可以利用Cas9-sgRNA对DNA进行切割产生双链断裂，随后细胞通过非同源末端连接方式修复DNA，在此过程中，将随机引入碱基的缺失或增加，基因发生移码突变，导致编码基因的敲除。
CRISPR基因编辑
以基因敲入或替换为目的时，需要借助同源重组原理。CRISPR/Cas9系统中的Cas9-sgRNA在靶位点进行切割产生DNA双链断裂，在模板DNA存在时，细胞通过同源重组方式修复DNA，而模板DNA可以被人为设计成需要插入的基因或需要修复的基因，此时细胞编码目的基因。
载体的选择（部分）
提供病毒载体的含Cas9蛋白的单载和双载系统，可根据目的基因序列设计多条gRNA，载体带有多种荧光抗性标记，方便筛选。
载体类别 | 编号 | 载体元件 |
CRISPR慢病毒单载体 | H5070 | pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE |
H7072 | pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-BSR-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE | |
H6825 | pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE | |
CRISPR慢病毒双载体 | H5068 | pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE |
H5450 | pLenti-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-espCas9_1.1-WPRE | |
CRISPR AAV单载体系统 | H6941 | pAAV-CMV-SaCas9-U6-sagRNA v2.0 |
H5273 | pAAV-hSyn-SaCas9-U6-sagRNA v2.0 | |
CRISPR AAV双载体系统 | H6291 | pAAV-CMV-EGFP-WPRE-U6-spgRNA v2.0 |
H12663 | pAAV-U6-shRNA/spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE | |
H11012 | pAAV-CMV-Luc2-WPRE-U6-spgRNA |
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