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腺病毒ADV

原文链接:和元生物——腺病毒ADV

腺病毒(Adenovirus, ADV)是一种无包膜的线性双链DNA病毒,具有广泛的细胞和组织感染能力。感染过程剧烈,适于短时间内进行基因高表达的实验,与其它病毒相比,腺病毒优势在于插入片段较长,表达活性强。
  体外应用时,腺病毒载体转基因效率高(接近100%的转导效率),且可转导不同类型的细胞,对于大量难转染细胞的基因递送是一个很好的工具。但是,在体内应用时,由于腺病毒免疫原性强,感染剧烈,故常会引起动物局部组织炎症反应和机体免疫反应,对动物体征和实验结果的客观性造成影响。

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ADV包装和侵染过程

腺病毒包装与纯化

  腺病毒包装骨架达质粒与穿梭质粒共转染HEK-293细胞,待细胞出现CPE状态后通过收集细胞上清和细胞裂解物,通过浓缩或氯化铯密度梯度离心纯化病毒。 

  CPE(Cytopathic Effect):病毒对组织培养细胞侵染后产生的细胞变性,利用此种病变效应可进行病毒定量。

腺病毒滴度检测

  检测方法:酶联免疫法腺病毒滴度测定,根据计算感染后染成褐色的阳性细胞数,来计算病毒滴度。
       实验原理:腺病毒感染的阳性细胞表达的衣壳蛋白被染成褐色。
       检测方法:免疫显色方法
       实验原理:通过抗5型腺病毒外壳蛋白的单抗与待感染腺病毒样品的细胞结合,再用HRP标记的二抗与一抗结合,经显色液显色,被感染的细胞变成褐色,根据阳性细胞数,来计算病毒滴度。

腺病毒载体优势

       ① 表达快,腺病毒感染细胞后,1-2天即可表达
       ② 载体容量大,感染效率高,常用于感染难感染的细胞
       ③ 不整合到染色体中,无插入致突变性
       ④  具有嗜肝性,易于感染肝细胞,腺病毒的体内应用是用于感染肝脏

    不过由于腺病毒免疫原性高,对某些对外源刺激敏感的动物模型和组织中易造成炎症,体内应用需谨慎。

不同病毒的生物学特性比较

2.png


载体选择

  和元生物拥有丰富的腺病毒产品,用于操作编码基因和非编码基因,如lncRNA、microRNA、circRNA。
       以下腺病毒载体可供您选择:

调控方式

载体编号

载体名称(载体元件顺序)

真核抗性

荧光

启动子

默认标签

载体容量

过表达

H225

pADV-mCMV-MCS-3xFLAG

N/A

N/A

mCMV

3FLAG

>6kb

H201

pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG

N/A

EGFP

mCMV

3FLAG

>5kb

H213

pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP

N/A

EGFP

mCMV

3FLAG

>5kb

H221

pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP

N/A

EGFP

mCMV

3FLAG

>5kb

H204

pADV-mCMV-mCherry-HA

N/A

mCherry

mCMV

HA

>5kb

H222

pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry

N/A

mCherry

mCMV

3FLAG

>5kb

H12588

pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG

N/A

mNeonGreen

CMV

3FLAG

>4kb

H12589

pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG

N/A

mScarlet

CMV

3FLAG

>4kb

circRNA过表达

H6946

pADV-CMV-S-circRNA

N/A

N/A

CMV

N/A

>5kb

miRNA过表达

H216

pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP

N/A

EGFP

U6

N/A

N/A

表达cre

K0024 

pADV-CMV-Cre

N/A

N/A

CMV

N/A

N/A

干扰

DKD001

pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP

N/A

EGFP

U6

N/A

N/A

DKD004

pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry

N/A

mCherry

U6

N/A

N/A

CRISPR敲除

H5064

pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9

N/A

N/A

U6

3FLAG

N/A

H9350

pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9

N/A

sfGFP

U6

3FLAG

N/A

H5066

pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP

N/A

EGFP

U6

N/A

N/A

H218

pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9

N/A

mCherry

CMV

3FLAG

N/A

H5449

pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1

N/A

mCherry

CMV

3FLAG

N/A

应用实例

  1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝脏]

3.png

  感染部位:肝脏

  载体名称:Ad-CBS

  注射方式:尾静脉

  注射量:1 x1011 PFU/mL,10ul

  检测时间:7天

  2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝脏]

4.png

  感染部位:肝脏

  载体名称:Ad-ATG7

  注射方式:尾静脉

  注射量:1 x109 PFU /只

  检测时间:10天

  3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]

5.png

  注射部位:大鼠大脑皮层

  载体名称:Ad-FBLN

  注射方式:脑立体定位注射

  注射量:三种不同剂量

  检测时间:7天

  和元生物腺病毒的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程,采用AdEasy及Admax腺病毒包装系统在HEK-293细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速密度梯度离心和过滤,并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定。一般情况下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。

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