常见问题-试剂产品问题解答-和元李记（上海）生物技术有限公司

Q：悬浮细胞和贴壁细胞在接种数量上有何区别？
大部分悬浮细胞相比贴壁细胞比较难显色，O.D.值偏低，一般需要增加细胞接种数量或延长加入CCK-8后的培养时间。贴壁细胞显色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。
Q：CCK-8对于不同的细胞，灵敏度是否一样？
不同细胞的脱氢酶活性不一样，显色程度不一样，因此灵敏度也不一样。
Q：若想提高转染效率，应该注意什么？
1：转染时细胞的密度90%-95%。 2：转染时，核酸和脂质体稀释液要用MEM无血清培养基。 3：转染后4-6h可选择换液。
Q：细胞冻存为什么要添加保护剂?
细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术。细胞在不加任何保护剂的情况下冷冻，细胞内外的水分会很快形成水晶从而引发一系列的不良反应：首先，部分蛋白质因局部电解质浓度增高和pH值改变而变性，导致细胞内部空间结构发生改变。其次，细胞内冰晶的形成和细胞膜系统上蛋白质，酶的变性等会限碍细胞的能量代谢。再次，胞膜上的类脂蛋白复合体在冷冻中易发生破坏引起胞膜通透性的改变，使细胞内容物丧失。最后，随着冷冻温度的降低，冰晶体积膨胀造成DNA的空间结构发生损伤从而引起细胞死亡。添加冷冻保护剂可以很好的改善细胞的破坏与死亡情况。
Q：冻存液配多了，不想浪费，可以留到下次用吗？
配好的冻存液在 4℃ 可以暂存 1 周，在 -20℃ 最多可保存一个月。不过最好还是现配现用、避免反复冻融。
Q：细胞复苏后只有非常少量细胞贴壁，是不是需要重新复苏？
先不要着急丢掉！可以补加血清和细胞因子，或者每隔 2-3 天换新鲜的生长培养基，经过 2-3 次换液后，大部分细胞就能看到明显增殖，此时再按照正常传代操作即可。当然，如果细胞库存充足，或者着急做实验，可以重新复苏一株细胞~
Q：为什么我复苏细胞的时候明明已经贴壁了，第二天再去看发现细胞全死了？
可能是细胞冻存之前消化过度，导致细胞凋亡，因此消化细胞时一定要严格控制消化时间哦！
Q：为什么我复苏的细胞完全不贴壁？
可能是由于细胞冻存前生长状态差或者复苏过程中动作慢，因此一定要挑选生长状态良好、处于对数生长期的细胞进行冻存，操作过程要遵循“慢冻快融”的原则！
Q：胰酶里为啥要加EDTA？
二价的离子会抑制胰酶活性，所以加入EDTA可以螯合掉Ca、Mg这样的二价离子。胰酶也要注意不要反复冻融哦！
Q：培养基里L-谷氨酰胺是干嘛用的？
L-谷氨酰胺的主要作用是在培养细胞的能量来源，参与蛋白质合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在一段时间内会在溶液中降解，但确切的降解率确实不清楚。 L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，氨对一些细胞有毒性。

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