常见问题-试剂产品问题解答-和元李记

Q：为什么我复苏的细胞完全不贴壁？
可能是由于细胞冻存前生长状态差或者复苏过程中动作慢，因此一定要挑选生长状态良好、处于对数生长期的细胞进行冻存，操作过程要遵循“慢冻快融”的原则！
Q：胰酶里为啥要加EDTA？
二价的离子会抑制胰酶活性，所以加入EDTA可以螯合掉Ca、Mg这样的二价离子。胰酶也要注意不要反复冻融哦！
Q：培养基里L-谷氨酰胺是干嘛用的？
L-谷氨酰胺的主要作用是在培养细胞的能量来源，参与蛋白质合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在一段时间内会在溶液中降解，但确切的降解率确实不清楚。 L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，氨对一些细胞有毒性。
Q：支原体污染是否能肉眼识别？
能，前提是你的眼睛有2000万像素，以及4000倍放大变焦功能。一般来说，污染了支原体的细胞，生长状态会变差，用肉眼基本很难判别到底是支原体污染还是你自己培养的时候在培养基里多加了一把盐……主要还是通过PCR检测或者是染色检测来区分支原体污染与否的。不过一旦污染，尽量丢弃，然后查看你的血清是否安全。
Q：几天换培养基？
正常情况下，培养液偏红色。如果细胞维持在pH6.5～6.6条件下，培养基变黄，说明培养液中代谢产物已堆积到一定量，细胞会脱落死亡，需要更换新鲜培养液。一般细胞生长旺盛时1～2天换一次，生长缓慢时，3～4天亦可。
Q：为什么细胞复苏后，很多难以贴壁?
可能是细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡。切记融化速度要快，也要离心去掉DMSO。若未贴壁的细胞依然存活，可以离心收集重新接种回原瓶中，并调整血清比例至15%辅助贴壁培养。
Q：培养基为什么一般都是偏红色?
因为培养基加了酚红作指示剂，指示pH范围为6~8，培养基偏酸则发黄，偏碱则发紫，需要及时换液，更换新鲜的培养基，以维持细胞良好的生长环境。一些特殊的细胞需要用无酚红的培养基，需要及时观察细胞。
Q：如何避免血清中沉淀物的出现？
首先要注意正确的血清解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动血清。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：（1）热灭活血清；（2）在 37℃ 下培养血清；（3）反复冻融；（4）γ 射线照射；（5）长期储存在 2-8℃；（6）在室温下放置时间过长
Q：血清中可能出现的沉淀物是什么？
基于多年的实验研究，用于细胞培养的胎牛血清以及其它血清中可能会存在以下种类的沉淀物：（1）纤维蛋白，它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到 1-2mm，可以用肉眼观察到。因为血清都是在低温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体）在处理过程中仍然处于溶解状态，当经过最后的过滤分装后，就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。（2）磷酸钙，它也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在 37℃ 培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。（3）胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。他们也是血清中出现沉淀物的常见原因。
Q：培养瓶是用密封盖好，还是用透气盖好？
都可以。只是在使用密封盖培养瓶时，瓶盖旋至约 2/3，不要完全拧紧，预留约 1/3 以便细胞可以透气；有些品牌的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。

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