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Q:Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。
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Q:是否有其他的检测凋亡的方法?
有的,AnnexinV检测法主要用于检测早期凋亡;中早期会出现细胞线粒体跨膜电位下降多 用JC-1等检测方法;中晚期会出现凋亡信号通路的活化,多检测Caspase3的活化水平;晚期会出现核内DNA的断裂多用Tunel方法进行检测。
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Q:Annexin VPI法为什么凋亡结果与预期不符?
处理时间过长,处理浓度过高,细胞初始活性差等原因导致的假阳性或假阴性结果。
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Q:流式测凋亡为何左上象限出奇的高?
左上象限一般是由于处理方式不当(机械力过大),处理时间太久或刺激物质浓度过高导致的环境骤变引起的非凋亡途径的细胞死亡,需要优化处理的浓度和时间梯度,以及优化细胞培养和细胞消化的流程。
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Q:Annexin VPI法如何避免出现假阳性结果?
细胞接种不易过密:接种对数生长期的细胞时密度不要>1*106,以免细胞培养过程中自身引起凋亡,而非外界处理因素;避免消化过度:因消化过度可能会造成PS外翻,得到假阳性的结果;操作尽量轻柔:收集细胞时力度过大很可能造成细胞膜损伤,导致细胞膜的磷脂层暴露,从而结合Annexin V,导致假阳性,因此处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤。
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Q:Annexin VPI法为什么必须收集细胞上清?
因为凋亡的细胞可能会脱壁,悬浮于培养基,所以必须收集上清再离心取沉淀,合并胰酶消化下来的细胞,否则检测出来的凋亡比例可能会减少。
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Q:Annexin VPI法为什么在染色后1h内就要上机检测?
由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析;PI受时间的影响很大,因标记了PI后会加大细胞毒性,特别是检测早期凋亡时,如果时间延长除了会导致在流式细胞仪上的细胞分群差距加大外,误差会明显加大,所以建议在一个小时内检测。
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Q:BCA蛋白定量法的优缺点有哪些?
优点:
1、此方法被广泛选用,操作简便、快速,45分钟内即可完成测试。比经典的Lowery法快4倍且更加;
2、不易受一般浓度去污剂、尿素等影响,抗干扰能力强;
3、检测不同蛋白质分子的变异系数也远小于考玛斯亮蓝法;
4、准确,灵敏度高,试剂稳定性好。BCA法在20-20 ug/mL浓度大范围内具有良好的线性关系,微量BCA测定范围在0.5-10 ug/ml。
5、经济实用,除试管外,测定可在微板孔中就进行,大大节约样品和试剂用量;
缺点:
1、可能会受螯合剂(EDTA、EGTA)和高浓度还原剂(DTT、β-巯基乙醇)的影响;
2、需要30分钟或者更长时间的恒温水浴孵育反应。
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Q:支原体清除剂可以和双抗一起用吗
不得与除青链霉素双抗外其它抗生素混用。
李记生物Quick Cell支原体清除剂(1000X),通过抑制支原体DNA回旋酶活性,进而有效抑制支原体DNA的复制,从遗传物质着手彻底杀灭支原体,让细胞彻底摆脱支原体污染的困扰,确保验结果的可信度。
主要用于清除细胞、血清、培养基中的支原体,整个过程仅需 3-5 d即可;本产品能够清除大部分种类的支原体,而对细胞本身无毒。
李记已验证上百种细胞,如:小鼠胚胎干细胞或iPS 细胞、人胚胎干细胞或iPS 细胞、HEK293、Hela、HepG2、HCT116、COS-7、Vero、Huh-7、MDCK、PANC-1、SW620、U2OS、MCF-7、MRC-5、NIH-3T3、CCC-ESF、CHO-S、CHO-K1、CHO-DG44、H295R、HL60、K562、MDA-MB-231、SP20、T47D、BM 和BV2 等。
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Q:长期保存肿瘤组织活性选择哪个试剂盒比较好?
活组织冻存试剂盒玻璃化冻存组织,可有效维持组织的形态结构和功能,组织活性从分子水平到组织水平均可得到高效保存,实现组织活性的长期高效保存,适用于动物组织和肿瘤组织的冷冻保存。活组织复苏试剂盒配合冻存试剂盒使用,即时复苏,可高效复苏保存组织活性。
产品特点:
• 玻璃化冻存技术,无需程序降温;
• 复苏后组织活性可保存80%以上,用于构建PDX/PDC模型,药敏试验及单细胞测序等;
• 无细菌、无真菌,无支原体;
• 2~8℃密封保存,有效期1年;
“和元李记”由和元生物 (股票代码:688238) 和李记生物合资成立的,主营“李记生物”“Life-ilab”试剂品牌