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Q:细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上去除DMSO?除少数特别注明对DMSO 敏感的细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,应直接放入含有10-15 ml新鲜培养基的培养角瓶中,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。
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Q:冷冻管应如何解冻?取出冷冻管后,须立即放入37℃水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。
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Q:悬浮性细胞应如何继代处理?一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,可将培养角瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞的培养液至另一新的培养角瓶,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。
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Q:什么是细胞的接种密度?依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。
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Q:FBS, FCS, CS, HS简写是什么意思?FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思,两者都是指胎牛血清,FCS是错误的使用字眼,请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。
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Q:如何选用特殊细胞系培养基?培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。
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Q:科研用胎牛血清FBS哪有卖?和元李记生物官网有卖的,李记胎牛血清每一批原血材料都经严格筛选,经过连续的3层 0.1 μm滤膜过滤,过滤材料符合美国FDA文件要求。整个生产过程符合国际胎牛血清生产标准,并且经过严格的质量控制和理、化、微生物指标的分析检测。其中,血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等,其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种,是细胞合成蛋白质的基本成分,其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成(称为必需氨基酸)。血清含有的激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子(如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等)。血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促粘附因子及其他活性物质,能促进细胞的生长、增殖和贴附。
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Q:培养细胞时应使用多少浓度的CO2?5%还是10%,或根本没有影响?一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使用10%CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时,则应使用5%CO2培养细胞。
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Q:购买的细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少的情形?研究人员在解冻细胞后出现细胞数目太少,大都是因为离心过程操作上的失误,造成细胞的物理性损伤,以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心,待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。
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Q:应如何避免细胞污染?细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。造成细胞污染的主要原因有无菌操作技术不当、操作室环境不佳、实验耗材污染、血清污染和细胞来源污染等。严格的无菌操作技术、清洁的环境和品质良好的细胞来源是避免污染的最好方法。
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