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Q：培养细胞时应使用多少浓度的CO2？5%还是10%，或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5%CO2培养细胞。
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Q：购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少的情形？研究人员在解冻细胞后出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。
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Q：应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。造成细胞污染的主要原因有无菌操作技术不当、操作室环境不佳、实验耗材污染、血清污染和细胞来源污染等。严格的无菌操作技术、清洁的环境和品质良好的细胞来源是避免污染的最好方法。
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Q：细胞冻存的步骤是什么？冻存方法一：冷冻管置于4°C 30~60 分钟→ (-20 °C30 分钟*) → -80 °C 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。 冻存方法二：冷冻管置于已设定程序的可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20°C 不可超过1 小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C 冰箱中，但存活率会降低。
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Q：DMSO的等级和无菌过滤方式？冷冻保存使用的DMSO等级必须为Tissue culture grade，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，避光保存。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO的Nylon材质滤膜。
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Q：细胞冷冻培养基的成份是哪些？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5-10% DMSO (dimethyl sulfoxide)和90-95 %原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成、且需提前放在4°C预冷。
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Q：合适的细胞接种密度是多少？依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦可能会导致细胞生长过慢。
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Q：一般动物细胞的离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300g (约1,000 rpm)，5-10分钟，过高转速将造成细胞死亡。
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Q：悬浮细胞应如何继代处理？一般仅需在原培养瓶中持续加入新鲜培养基，稀释细胞浓度即可，若培养液太多，可将培养瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞的培养液至另一新的培养瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。
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Q：培养基中是否须添加抗生素？除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素，但实际操作中有时会加入1%的青链霉素来避免细菌污染。
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