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Q:如何做血清的梯度替换?替换方法为:完全培养基配置过程中先用25%新血清与75%原血清进行混合,培养传代1-2次;而后用50%新血清与50%原血清混合培养传代;再用75%新血清与25%原血清混合培养传代;最后完全使用新血清培养传代。
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Q:血清的热灭活是必须的吗?非必须血清不需要做热灭活,而少数对补体敏感的细胞实验,如某些免疫学实验或腺病毒包装等,可酌情对血清进行热灭活操作。
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Q:如何判断血清污染?(1)检查并判断外包装是否有破损; (2)将血清接种到血酯板上,培养后看是否有菌落形成; (3)可通过质量检测试剂盒检测结果判定,如支原体检测试剂盒等。血清污染主要包括细菌污染、真菌污染和支原体污染。
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Q:血清中的小黑点是“黑胶虫”么?血清解冻过程温差过大、经反复冻融或通过热灭活处理后更容易产生沉淀,这些沉淀物在镜下观察时有一些会呈现以布朗运动的小黑点,业内流行一种“黑胶虫”污染的说法。小L推荐李记黑胶虫去除剂Cat:AC16L121
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Q:血清解冻后发现絮状沉淀该如何处理?血清解冻过程中温差带来了脂蛋白变性和纤维蛋白析出,沉淀本身不会影响血清质量,也不会对实验结果造成影响。但如必须处理沉淀,则可通过离心方式去除,如500-1000×g离心5-10 min。
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Q:如何进行血清的程序性解冻?程序性解冻血清可以确保血清制品质量的稳定性,且不会因为温差过大而析出过多蛋白等沉淀。程序性解冻方法是于实验开始之前将冷冻的血清置于4℃冰箱中融解,并且在解冻过程中每隔1小时摇匀一次,使温度与成分均一,减少沉淀析出,直至全部解冻,然后再移入室温条件下使用。
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Q:血清长期储存的条件和方法是什么?血清如需长期保存,则必须储存于-10℃或更低温冰箱中,建议存放于-20℃的冰箱中。研究表明储存在-80℃条件下的血清在性能方面变化不大,但由于解冻时温差过大,会导致析出更多沉淀,使得背景杂乱,因此血清长期保存不建议处于-80℃条件下。如果近期会频繁使用血清,我们建议不要在4℃条件下存放超过1个月,若一次无法用完整瓶建议分装后保存,且要避免反复冻融。
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Q:快速封闭液好用,但放久了有沉淀,摇一摇又没了?是Tween20,它室温放久了会慢慢氧化沉淀,晃一晃即可。4℃保存会比较稳定不出沉淀。
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Q:为什么有时血清中出现絮状沉淀?是否需要去除?如何去除?多种原因可能导致絮状沉淀的形成,最常见的原因之一是融化过程中,脂蛋白聚集所致。该现象一般不会影响产品质量。可以 400 g 离心 5 分钟,取上清,然后过滤。根据需要选择合适的滤膜孔径,一般最常用的是 0.22 um PES 材质的滤膜。为避免滤膜阻塞,建议离心后取上清加入培养基内一起过滤而不是直接过滤血清。
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Q:胎牛血清和新生牛血清的质量哪个更好?胎牛血清是品质最高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少;牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。
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