常见问题-试剂产品问题解答-和元李记

Q：CCK-8检测溶液对细胞是否有毒？

CCK-8溶液自身因为高浓度的PMS的存在而具有一点毒性。但是，加到培养基中的CCK-8是没有毒性的，因为被稀释了10倍。因此，长时间的培养，如过夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK-8检测后还可以用于其他细胞增殖检测，如结晶紫检测，中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK-8的耐受力都不同，因此在需要进行长时间培养时，先检测一下细胞在加入CCK-8培养后的活力。
Q：脱脂奶粉和BSA封闭有区别吗？

一般来讲，BSA 会产生更清晰的结果，因为 BSA 含有较少的蛋白，抗体与之发生交叉反应的概率较低。但并非总是如此，有些抗体在脱脂奶粉中的封闭效果更好，因为脱脂奶粉中含有更多种类的封闭蛋白，能封闭更多不同类型的蛋白质。
Q：WB实验中一般需要多少个细胞？

一般5×10⁶足够。但要看是哪种细胞，有的细胞的体积就很小，而有的细胞则铺得很开。常规做WB一个孔道上样要10⁵个细胞。但也和目的蛋白及提取的方式有关。如果是膜蛋白或是某细胞器内分布的蛋白细胞数得增多。
Q：李记生物的线粒体标记试剂盒植物细胞能用吗？

可以标记植物细胞，但是由于植物细胞有细胞壁，会阻挡染料进入细胞，需要客户制作成原生质体后再进行染色
Q：Annexin V相关试剂盒能否检测人以外的其他细胞凋亡情况？

可以，因为Annexin V 是与磷脂酰丝氨酸（PS）的结合，而PS基本不存在种属间差异。
Q：高效进行细胞冻存应该注意什么？

1）缓慢冷冻
慢冻可使细胞逐步脱水，细胞不会因产生大的冰晶而受到损害。相反，细胞内若出现大结晶会引起细胞膜、细胞器的损伤和破裂。
2）细胞活力及浓度
细胞应在生长良好、致密度约为80-90%活力达90%以上的状态下冻存。细胞活力差的细胞在冻存后的成活率很小，因此，一定要在细胞旺盛分裂时期冻存。
3）冻存密度
冻存时细胞密度少于5x105个活细胞/mL时，很难成功复苏。
4）冻存管盖子
冻存管的盖子一定要拧紧，否则水浴复苏时水会渗入造成污染。
5）冻存时间
细胞不可长期保存在-80℃冰箱中。
Q：细胞冻存和复苏的最佳时间是什么时候？

细胞在体外生长期间，通常分为三个阶段:潜伏期、指数生长期和平台期。潜伏期通常是细胞刚刚传代，此时细胞开始贴附基质和伸展骨架，代谢活动集中在粘附蛋白和骨架蛋白的表达，细胞量在这段时间内几乎没有增加。
随后，细胞开始指数生长期，核酸转录翻译旺盛，DNA解旋、配对频繁，胞内物质传递迅速，细胞数量迅速增长。如果在这个时期冻存，实际上是强行将细胞冻结在代谢的某一时刻，势必造成对解旋的DNA、转录翻译中的RNA和蛋白的机械损伤，增加个别环节发生错误的风险。
随着细胞数量的增长，培养容器内，细胞汇合达到90%以上。大部分细胞因为“接触抑制”而停止高速代谢和增殖，胞内活动趋于平缓。
所以，我们建议在刚刚进入平台期时冻存细胞，既可以获得足量的细胞，也不会对细胞造成过多的机械损伤。
Q：转染试剂转单个质粒和多质粒共转的效率如何？

单转效率对于验证过的细胞效率都是很好，可以参考验证过的细胞系，对于共转由于要涉及到质粒的混合比例和质粒与转染试剂的添加比例问题，因此具体的效率需要做相应的验证。
Q：转染试剂可以冻存吗？

不可以冻存，因为转染试剂是一种阳离子聚合物转染试剂，由于聚合物是不能在低温下冻存，因此转染试剂最好是 4℃储存，保持最好的转染效能。
Q：转染试剂转染后需要换液吗？

对于换液可以区分两种情况：
1、转染之前如果没有换液，应在转染 6-8 小时左右后换液，以保证细胞生长所需营养；
2、转染之前如果有换液，可以按照平时等到培养基出现营养不足时换液。转染试剂本身没有毒性。

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