FITC染色不上的原因分析及解决办法?
1、 细胞团没分开。 解决方法:建议离心力设置在500-1000g,如果离心力太低,收集到的都是正常细胞,凋亡的细胞和碎片会丢失这样凋亡率会低;
2、 没有做单染对照。 解决方法:每家试剂盒荧光值和背景不一样,十字门位置都不一样。如:对比李记,国产美*偏左,国产翌*偏右,因此建议客户做单染划门;
3、 细胞太多。 解决方法:图片上无信号,意味着没检测到,也就是信号超过检测范围了,建议设置参数10000个细胞数; 4、 FITC染不上。 解决方法:一般冻存会对FITC有影响,李记产品建议是不可冻存;
5、染料浓度和作用时间,孵育条件等也是影响染色的主要原因。解决方法:不同细胞不会完全一样,都有最佳条件,需要摸索确认。
6.细胞本身凋亡刺激的不够。 解决方法:调整下药物作用时间和浓度。
7.细胞本身状态,例如细胞过度增殖的细胞对凋亡刺激不敏感。 解决方法:确认细胞状态。
8.贴壁细胞消化时间过长,膜表面PS受损, Annexin V结合位点变少。 解决方法:调整细胞消化时间,不要过度消化