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Q：细胞冻存的步骤是什么？冻存方法一：冷冻管置于4°C 30~60 分钟→ (-20 °C30 分钟*) → -80 °C 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。 冻存方法二：冷冻管置于已设定程序的可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20°C 不可超过1 小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C 冰箱中，但存活率会降低。
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Q：DMSO的等级和无菌过滤方式？冷冻保存使用的DMSO等级必须为Tissue culture grade，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，避光保存。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO的Nylon材质滤膜。
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Q：细胞冷冻培养基的成份是哪些？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5-10% DMSO (dimethyl sulfoxide)和90-95 %原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成、且需提前放在4°C预冷。
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Q：合适的细胞接种密度是多少？依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦可能会导致细胞生长过慢。
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Q：一般动物细胞的离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300g (约1,000 rpm)，5-10分钟，过高转速将造成细胞死亡。
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Q：悬浮细胞应如何继代处理？一般仅需在原培养瓶中持续加入新鲜培养基，稀释细胞浓度即可，若培养液太多，可将培养瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞的培养液至另一新的培养瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。
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Q：培养基中是否须添加抗生素？除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素，但实际操作中有时会加入1%的青链霉素来避免细菌污染。
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Q：可否使用与原先培养条件不同的血清？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
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Q：可否使用与原先培养条件不同的培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞可能无法立即适应，导致细胞状态不好甚至死亡。
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Q：细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，可直接放入10-15ml新鲜培养基，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
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