“和元李记”由和元生物 (股票代码:688238) 和李记生物合资成立的,主营“李记生物”“Life-ilab”试剂品牌

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  • Q:细胞冻存的步骤是什么?
    冻存方法一:冷冻管置于4°C 30~60 分钟→ (-20 °C30 分钟*) → -80 °C 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。 冻存方法二:冷冻管置于已设定程序的可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20°C 不可超过1 小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80°C 冰箱中,但存活率会降低。
  • Q:DMSO的等级和无菌过滤方式?
    冷冻保存使用的DMSO等级必须为Tissue culture grade,其本身即为无菌状况,第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,避光保存。若要过滤DMSO,则须使用耐DMSO的Nylon材质滤膜。
  • Q:细胞冷冻培养基的成份是哪些?
    动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5-10% DMSO (dimethyl sulfoxide)和90-95 %原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合之。注意:由于DMSO稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成、且需提前放在4°C预冷。
  • Q:合适的细胞接种密度是多少?
    依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦可能会导致细胞生长过慢。
  • Q:一般动物细胞的离心速率应为多少转速?
    欲回收动物细胞,其离心速率一般为300g (约1,000 rpm),5-10分钟,过高转速将造成细胞死亡。
  • Q:悬浮细胞应如何继代处理?
    一般仅需在原培养瓶中持续加入新鲜培养基,稀释细胞浓度即可,若培养液太多,可将培养瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞的培养液至另一新的培养瓶,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。
  • Q:培养基中是否须添加抗生素?
    除于特殊筛选系统中外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素,但实际操作中有时会加入1%的青链霉素来避免细菌污染。
  • Q:可否使用与原先培养条件不同的血清?
    不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
  • Q:可否使用与原先培养条件不同的培养基?
    不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞可能无法立即适应,导致细胞状态不好甚至死亡。
  • Q:细胞冷冻管解冻培养时,是否应马上去除DMSO?
    除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,可直接放入10-15ml新鲜培养基,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
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