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Q:活组织冻存复苏试剂盒的优势有哪些?
冻存:
✔ 冻存前后PDX成瘤能力基本不变;
✔ 冻存后可长期保存;
✔ 可替代冰冻切和石蜡包埋组织;
✔ 实现DNA、RNA和蛋白活性保存;
复苏:
✔ 复苏后形态功能与新鲜组织一致;
✔ 复苏后仍可分离原代细胞;
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Q:李记生物的慢病毒保存液里面含DMSO吗?
李记生物的EZ 慢病毒冻存液产品中的缓冲液组分经过优化,使用了Hepes和碳酸氢钠进行缓冲,添加了L-谷氨酰胺、微量元素、冻存保护剂等成分,不含DMSO,适用于超速离心后、PEG沉淀后、超滤浓缩后的慢病毒重悬。使用本产品重悬后的慢病毒颗粒毒性小、存储时间久、反复冻融次数多。
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Q:预染蛋白质Marker在转印过程中条带在膜上褪色?
褪色最可能是由于封闭/洗涤液中的洗涤剂将一些蛋白质从膜上洗脱造成的。染料本身不会从蛋白质上洗脱,因为它们是共价结合的。已经发现较小孔径的膜可以在封闭和洗涤过程中更好地保留蛋白质,因此,为了获得绝佳的分辨率和蛋白质保留率,推荐使用0.2 µm代替0.45 µm的膜。转印后,可以用铅笔在膜上圈出预染条带,从而在封闭和处理后仍可辨认条带位置。
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Q:做WB实验时,预染蛋白Marker条带为什么也曝光?
预染蛋白Marker是由重组蛋白组成,可能所使用的蛋白Marker含有His标签。若一抗使用的是his标签,二抗除了跟带his标签的一抗结合外,还会跟带His标签的蛋白Marker条带结合,因此,加入ECL发光液后,蛋白Marker和样品中目的蛋白一同曝光。
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Q:预染蛋白Marker能否被考马斯亮蓝染色?
有些预染Marker可以被考马斯亮蓝染色,有些不可以。原因:考马斯亮蓝含有偏酸性的基团,如R-250分子中,含有两个-HSO3,酸性基团可以结合到蛋白质的碱性基团上,从而使得蛋白染上颜色,蛋白量越高,颜色越深。预染蛋白Marker为不同大小的蛋白和染料共价结合,根据染料的不同,结合蛋白质的位置也不同,如果Marker上染料结合了考马斯亮蓝结合基团,则不能够再次结合考马斯亮蓝去染色。否则考马斯亮蓝能够结合可以染色。
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Q:使用预染蛋白Marker有哪些注意事项
1)由于预染的蛋白Marker与染料的偶联作用导致在不同缓冲液中Marker迁移率不同,使用前需注意选择适当缓冲体系。若使用说明书中未涉及的电泳缓冲液,建议用非预染蛋白Marker对该预染蛋白Marker先进行分子量标定;
2)在低浓度胶中,低分子量蛋白会泳动于染料前缘;
3)大分子量蛋白Western blot时需要延长转膜时间或加高转膜电压。
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Q:培养的细胞出现细菌污染怎么判断?
细菌污染的细胞过夜培养后,培养基会显著变黄,培养瓶内肉眼可见细菌沉淀,晃动培养基会有浑浊现象,显微镜下观察细胞可以看到很细的沙状物覆盖整个培养瓶底部。细胞碎片与污染的分辨可以通过过夜培养判断,过夜不会浑浊的主要是细胞碎片及代谢产物,过夜会明显变黄浑浊的可以判断为污染。细胞出现细菌污染一般1-2天即会爆发至肉眼可见状态,细菌污染一般不会交叉污染,及时处理掉污染的细胞即可。
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Q:组织运输液和RNA later区别在哪?
RNAlater溶液是一种水溶性、无毒性组织储存试剂,其可迅速渗透到组织内以稳定和保护细胞的RNA。我们的组织运输液有效降低组织在低温、储存时发生的损伤,避免组织生物成分降解,以及酶和RNA失活,保护细胞膜和组织结构完整。稳定生物活性,维持形态结构和功能。新鲜组织储存后,可用于病理和生理学检测分析。成分明确,不含蛋白和动物来源成分。
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Q:培养基中添加抗生素的原因是什么?
添加抗生素可以有效抑制培养物中的细菌、真菌等微生物的污染,保持培养物的纯净度。常用的抗生素有青霉素、链霉素、庆大霉素等。但需要注意的是,抗生素的添加应该谨慎,过量使用可能会对细胞产生不良影响。
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Q:培养基中添加的胰酶的作用是什么?
胰酶在培养基中主要用于细胞的消化和传代。胰酶可以降解细胞外基质,使细胞能够从培养瓶底脱落,并且可以促进细胞的分裂和增殖。在传代过程中,胰酶的作用可以帮助细胞的分离和传代操作。
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