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Q:贴壁细胞消化后可不可以离心后加入Trizol呢?有影响吗?
可以,用少量PBs重悬,然后用trizol提取,不过提取要快,不能存放,因为细胞为活体,表达受外界环境影响,要是已经存放了两小时,建议重做。
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Q:胰腺组织RNA提取时在研磨时总是粘在研钵,怎么处理?有什么好的方法吗?
取出胰腺组织后立刻浸入液氮中,然后将其转移至研钵中(研钵要经180度干烤4-8小时,除去RNAase),持续研磨,一边研磨一边加液氮,研磨成粉末。此时要注意液氮的补充,如果组织化开就会出现组织粘在研钵内的情况。研磨成粉末后加入Trizol,此时,由于低温Trizol也会冻住,持续研磨至Trizol化开并澄清亮,就可以了。然后离心,进行下面的步骤。也可以使用匀浆器,很便宜,也很简单。当然要经去处RNAase处理。在冰上将组织研磨成匀浆即可。
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Q:悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别?
悬浮细胞由于染色比较困难,一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞染色比较容易,若细胞数量过大,有时吸光度会超过酶标仪的读数。
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Q:做活细胞检测时,每孔应该接种多少个细胞?
当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔(100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100 μL培养基)。
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Q:CCK-8能否对活细胞进行染色?
不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST-8),并通过电子载体PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST8上。由于生成的甲臜也是高度水溶性的,因此CCK-8不能对细胞进行染色。
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Q:如何减少由于CCK-8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差?
可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样。
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Q:实验之前,是否需要先检测一下培养基和CCK-8是否会反应?
需要,可用一个孔检测一下,因为有培养基中可能含有氧化还原反应的物质,在正式实验之前有必要先确认培养基和CCK-8是否反应。一般正常在的OD值应该在0.4以下。
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Q:CCK-8能否检测细菌细胞?
可以检测E.coli(肠致病性大肠杆菌即大肠埃希氏菌),但不能检测酵母细胞。向100μl E.coli培养液中加入10μl CCK-8溶液,并培养1-4个小时或过夜。
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Q:CCK-8试剂的保存条件?
李记生物的cck-8试剂盒保存条件:4℃短期保存,有效期3个月;-20℃长期保存,有效期24个月。
【注】:反复冻融会造成测定背景OD值升高。
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Q:CCK-8检测溶液对细胞是否有毒?
CCK-8溶液自身因为高浓度的PMS的存在而具有一点毒性。但是,加到培养基中的CCK-8是没有毒性的,因为被稀释了10倍。因此,长时间的培养,如过夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK-8检测后还可以用于其他细胞增殖检测,如结晶紫检测,中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK-8的耐受力都不同,因此在需要进行长时间培养时,先检测一下细胞在加入CCK-8培养后的活力。
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