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Q：培养的细胞出现细菌污染怎么判断？
细菌污染的细胞过夜培养后，培养基会显著变黄，培养瓶内肉眼可见细菌沉淀，晃动培养基会有浑浊现象，显微镜下观察细胞可以看到很细的沙状物覆盖整个培养瓶底部。细胞碎片与污染的分辨可以通过过夜培养判断，过夜不会浑浊的主要是细胞碎片及代谢产物，过夜会明显变黄浑浊的可以判断为污染。细胞出现细菌污染一般1-2天即会爆发至肉眼可见状态，细菌污染一般不会交叉污染，及时处理掉污染的细胞即可。
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Q：贴壁细胞消化后可不可以离心后加入Trizol呢？有影响吗？
可以，用少量PBs重悬，然后用trizol提取，不过提取要快，不能存放，因为细胞为活体，表达受外界环境影响，要是已经存放了两小时，建议重做。
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Q：胰腺组织RNA提取时在研磨时总是粘在研钵，怎么处理？有什么好的方法吗？
取出胰腺组织后立刻浸入液氮中，然后将其转移至研钵中（研钵要经180度干烤4－8小时，除去RNAase），持续研磨，一边研磨一边加液氮，研磨成粉末。此时要注意液氮的补充，如果组织化开就会出现组织粘在研钵内的情况。研磨成粉末后加入Trizol，此时，由于低温Trizol也会冻住，持续研磨至Trizol化开并澄清亮，就可以了。然后离心，进行下面的步骤。也可以使用匀浆器，很便宜，也很简单。当然要经去处RNAase处理。在冰上将组织研磨成匀浆即可。
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Q：悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别？
悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞染色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。
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Q：做活细胞检测时，每孔应该接种多少个细胞？
当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔(100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100 μL培养基)。
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Q：CCK-8能否对活细胞进行染色？
不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST-8)，并通过电子载体PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST8上。由于生成的甲臜也是高度水溶性的，因此CCK-8不能对细胞进行染色。
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Q：如何减少由于CCK-8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差？
可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样。
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Q：实验之前，是否需要先检测一下培养基和CCK-8是否会反应？
需要，可用一个孔检测一下，因为有培养基中可能含有氧化还原反应的物质，在正式实验之前有必要先确认培养基和CCK-8是否反应。一般正常在的OD值应该在0.4以下。
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Q：CCK-8能否检测细菌细胞？
可以检测E.coli（肠致病性大肠杆菌即大肠埃希氏菌），但不能检测酵母细胞。向100μl E.coli培养液中加入10μl CCK-8溶液，并培养1-4个小时或过夜。
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Q：CCK-8试剂的保存条件？
李记生物的cck-8试剂盒保存条件：4℃短期保存，有效期3个月；-20℃长期保存，有效期24个月。
【注】：反复冻融会造成测定背景OD值升高。
“和元李记”由和元生物 (股票代码：688238) 和李记生物合资成立的，主营“李记生物”“Life-ilab”试剂品牌
