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Q：胰蛋白酶与胶原蛋白酶作用一样吗？
要使细胞相互分离，可以用酶将细胞间粘连着的蛋白质(如胶原蛋白、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、弹性蛋白等)消化了。教材采用的酶是胰蛋白酶或胶原蛋白酶，这里的“或”不是任意选择的意思，因为这2种酶的作用对象并不一样。
胰蛋白酶是一种胰脏制品，能强烈地消化细胞间质较少的软组织如肝、肾、甲状腺﹑羊膜、胚胎组织等，而对含结缔组织较丰富的如乳腺、滑膜、子宫、纤维肉瘤﹑肿瘤组织等则无效，而且如果消化时间过长，还会损害细胞的呼吸酶和细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此，消化后要马上对培养细胞进行洗涤。
胶原蛋白酶则是一种从细菌中提取出来的酶，适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织，它对细胞间质中的胶原成分有较好的消化作用，虽然作用缓慢但因对细胞本身影响不大，故还是能达到分散细胞的目的。
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Q：为何细胞培养基偏黄或偏紫？
细胞培养基变黄是因为细胞密度过大产生大量酸性代谢废物，PH升高后导致酚红变色，提示细胞营养不足。细胞培养基变紫是因为培养液中CO2 逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性从而变紫。
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Q：如何控制胰酶消化时间？
倒置显微镜下观察细胞明显变圆、变亮且细胞间隙增大，轻轻晃动可见悬浮细胞、但还没有出现大片脱落时即可终止（不可过分消化、影响细胞活性；新买的细胞建议每30秒观察记录最佳时间）。
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Q：提取原代细胞经常发生污染可以怎样改善？
首先要确保细胞分离实验室是否存在细菌污染，如果存在问题，需要将实验室进行消毒，培养箱灭菌，检查试剂耗材是否可用，第二个就是注意无菌操作，保证试剂、剪刀镊子等无菌，第三是可以在培养液中加抗生素，双抗、两性霉素等。
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Q：贴壁的原代细胞很难消化是怎么回事？
细胞初代培养时在细胞皿上培养的时间过长，解决方法可以将酶的浓度降低，37℃培养箱中延长消化时间，或者分步消化。
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Q：原代细胞可以冻存吗？冻存复苏后活率差的原因是什么？
这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞，不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等，可以扩增培养和再次冻存。然而，需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。冻存后复苏活率低需要考虑冻存前细胞活性，细胞量以及冻存体系，冻存体系是指用的含血清的冻存液，还是一步冻存液，不同冻存方法对应的操作方法不同需要注意。
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Q：原代细胞一般第几代做实验比较好？
5代以内，3代最好。
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Q：培养的细胞出现细菌污染怎么判断？
细菌污染的细胞过夜培养后，培养基会显著变黄，培养瓶内肉眼可见细菌沉淀，晃动培养基会有浑浊现象，显微镜下观察细胞可以看到很细的沙状物覆盖整个培养瓶底部。细胞碎片与污染的分辨可以通过过夜培养判断，过夜不会浑浊的主要是细胞碎片及代谢产物，过夜会明显变黄浑浊的可以判断为污染。细胞出现细菌污染一般1-2天即会爆发至肉眼可见状态，细菌污染一般不会交叉污染，及时处理掉污染的细胞即可。
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Q：贴壁细胞消化后可不可以离心后加入Trizol呢？有影响吗？
可以，用少量PBs重悬，然后用trizol提取，不过提取要快，不能存放，因为细胞为活体，表达受外界环境影响，要是已经存放了两小时，建议重做。
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Q：胰腺组织RNA提取时在研磨时总是粘在研钵，怎么处理？有什么好的方法吗？
取出胰腺组织后立刻浸入液氮中，然后将其转移至研钵中（研钵要经180度干烤4－8小时，除去RNAase），持续研磨，一边研磨一边加液氮，研磨成粉末。此时要注意液氮的补充，如果组织化开就会出现组织粘在研钵内的情况。研磨成粉末后加入Trizol，此时，由于低温Trizol也会冻住，持续研磨至Trizol化开并澄清亮，就可以了。然后离心，进行下面的步骤。也可以使用匀浆器，很便宜，也很简单。当然要经去处RNAase处理。在冰上将组织研磨成匀浆即可。
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