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总RNA提取试剂盒(trizol)

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  • AN51L758
    100mL
    298
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产品描述

总RNA提取试剂(trizol)(下文简称“trizol”)的主要成分是异硫氰酸胍,它可以破坏细胞,使细胞RNA释放出来,同时保护RNA的完整性,因此,常用于动植物细胞RNA的提取。

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总RNA提取试剂(trizol)

AN51L758

100mL

运输与保存

常温运输。4℃避光保存,有效期12个月。

使用方法

1.    准备样品

l  组织样品:液氮研磨组织法,组织块直接放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨,待组织变软,再加少量液氮,再研磨,如此三次后,按组织样品质量与trizol体积按照50~100 mg/mL加入,匀浆。【注】:组织体积不能超过trizol体积的10%, 否则匀浆效果不好,用电动匀浆器匀浆约需1~2 min 。

l  细胞:培养贴壁细胞不须消化,可直接用trizol进行消化及裂解,trizol体积按10 cm²/mL比例加入;悬浮细胞可直接收集,消化裂解,每1 mL trizol可裂解 5×106动物、植物或酵母细胞,或1×107细菌细胞。

2.    细胞或组织加trizol后,室温放置5 min,使其充分裂解。【注】:此时可放入﹣70℃ 长期保持。

3.    12,000g离心5 min,弃沉淀。

4.    按200 μL氯仿/mL trizol加入氯仿,振荡混匀后室温放置15 min。【注】:禁用漩涡振荡器,以免基因组DNA断裂。

5.    4℃ 12,000g离心15 min 。

6.    吸取上层水相,至另一离心管中。【注】:千万不要吸取中间界面:若同时提取DNA和蛋白质,则保留下层酚相存于4℃ 冰箱,若只提RNA,则弃下层酚相。

7.    0.5mL异丙醇/mL trizol加入异丙醇混匀,室温放置5~10 min 。

8.    4℃ 12,000g离心10 min, 弃上清,RNA沉于管底。

9.    按1 mL 75%乙醇/mL trizol加入75% 乙醇,温和振荡离心管,悬浮沉淀。

10.  4℃ 8,000g 离心5 min, 尽量弃上清液。

11.  室温晾干或真空干燥5~10 min。【注】:RNA样品不要过于干燥,否则很难溶解。

12.  可用50 μL H2O、TE buffer或0.5% SDS溶解RNA样品,55~60℃ ,5~10 min。【注】:H2O.TE或0.5% SDS均须用DEPC处理并高压。

注意事项

1.    本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.    操作人员应经过专门培训,严格遵守操作规程。

3.    操作处置应在具备局部通风或全面通风换气设施的场所进行。

4.    避免眼和皮肤的接触,避免吸入蒸汽。

5.    远离火种、热源,工作场所严禁吸烟。

6.    整个提RNA过程需要无RNase的实验用具。

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