常见问题-试剂产品问题解答-和元李记

Q：ROS检测试剂盒适合用在哪些检测上？
一般用于哺乳动物细胞的检测，只适合活细胞或活体的活性氧检测。
Q：ROS检测试剂盒适合血清或血浆中的检测吗？
不适合用于血清或组织匀浆液ROS的检测。新鲜组织制备的单细胞悬液可以尝试。
Q：FITC染色不上的原因分析及解决办法？
1、细胞团没分开。解决方法：建议离心力设置在500-1000g，如果离心力太低，收集到的都是正常细胞，凋亡的细胞和碎片会丢失这样凋亡率会低； 2、没有做单染对照。解决方法：每家试剂盒荧光值和背景不一样，十字门位置都不一样。如：对比李记，国产美*偏左，国产翌*偏右，因此建议客户做单染划门； 3、细胞太多。解决方法：图片上无信号，意味着没检测到，也就是信号超过检测范围了，建议设置参数10000个细胞数; 4、 FITC染不上。解决方法：一般冻存会对FITC有影响，李记产品建议是不可冻存； 5、染料浓度和作用时间，孵育条件等也是影响染色的主要原因。解决方法：不同细胞不会完全一样，都有最佳条件，需要摸索确认。 6.细胞本身凋亡刺激的不够。解决方法：调整下药物作用时间和浓度。 7.细胞本身状态，例如细胞过度增殖的细胞对凋亡刺激不敏感。解决方法：确认细胞状态。 8.贴壁细胞消化时间过长，膜表面PS受损， Annexin V结合位点变少。解决方法：调整细胞消化时间，不要过度消化
Q：使用慢病毒冻存液时需要分装储存吗？
为避免同一支病毒多次反复冻融，造成滴度下降，建议使用时进行分装。分装过程中要保证在无菌环境冰上操作，分装体积根据每次实验病毒用量进行分装，不宜过少，建议不低于10uL。分装后的病毒如在短期内使用，可将病毒暂时放置于4℃保存(一周内用完)余下的应在分装后立即置于-80℃保存。
Q：李记考马斯亮蓝快速染色液的灵敏度有多高？
灵敏度达到纳克级（0.4ng），通过大量实验数据表明，该款染液在2分钟内就能使胶上蛋白显色，灵敏度极高。
Q：使用李记考马斯亮蓝快速染色液，为什么不再需要脱色？
跑完胶后，蛋白附着在胶上面。若使用传统染色液，在染蛋白的时候，把整个胶都染上了，所以需要把胶背景上的染色液洗脱掉。使用李记考马斯，特异性强只染蛋白、不染胶，也就无需再进行脱色。
Q：李记生物的1xPBS与10xPBS分别是多少浓度？
1xPBS的工作浓度为 0.01M（摩尔浓度），10xPBS工作浓度为0.1M（摩尔浓度）
Q：用CCK-8测细胞活力时每次都要做标准曲线吗？
建议每次做。虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样。对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线。
Q：CCK-8对于不同的细胞,灵敏度是否一样？
不一样。悬浮细胞较贴壁细胞难染色。对于贴壁细胞，一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。
Q：做细胞加药实验时，药物对CCK-8测定是否有影响？
1、注意如果药物具有还原性（如维生素C）会和CCK-8发生显色反应，增加吸光度。 2、药物中的金属对CCK-8显色有影响：当终浓度为1mM的氯化亚铅、氧化铁、硫酸铜会抑制5%,15%, 90%的显色反应,使灵敏度降级。如果终浓度是10mM的话，将会100%抑制。解决办法：首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK-8,测定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基(加CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响，可在加CCK-8之前更换培养基,去掉药物的影响。 3、由于培养基中可能含有氧化还原反应的物质，在正式实验之前，建议使用一个孔作一下检测，有必要先确认培养基和CCK-8是否反应，一般正常的OD值应该在0.4以下。

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