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Q:使用慢病毒冻存液时需要分装储存吗?为避免同一支病毒多次反复冻融,造成滴度下降,建议使用时进行分装。分装过程中要保证在无菌环境冰上操作,分装体积根据每次实验病毒用量进行分装,不宜过少,建议不低于10uL。分装后的病毒如在短期内使用,可将病毒暂时放置于4℃保存(一周内用完)余下的应在分装后立即置于-80℃保存。
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Q:李记考马斯亮蓝快速染色液的灵敏度有多高?灵敏度达到纳克级(0.4ng),通过大量实验数据表明,该款染液在2分钟内就能使胶上蛋白显色,灵敏度极高。
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Q:使用李记考马斯亮蓝快速染色液,为什么不再需要脱色?跑完胶后,蛋白附着在胶上面。若使用传统染色液,在染蛋白的时候,把整个胶都染上了,所以需要把胶背景上的染色液洗脱掉。使用李记考马斯,特异性强只染蛋白、不染胶,也就无需再进行脱色。
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Q:李记生物的1xPBS与10xPBS分别是多少浓度?1xPBS的工作浓度为 0.01M(摩尔浓度),10xPBS工作浓度为0.1M(摩尔浓度)
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Q:用CCK-8测细胞活力时每次都要做标准曲线吗?建议每次做。 虽然细胞是一样的,但是细胞的状态不一定一样。对于状态不一样的细胞,建议每次做标准曲线。
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Q:CCK-8对于不同的细胞,灵敏度是否一样?不一样。 悬浮细胞较贴壁细胞难染色。对于贴壁细胞,一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高,但对于悬浮细胞则可能吸光度较低,可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。
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Q:做细胞加药实验时,药物对CCK-8测定是否有影响?1、注意如果药物具有还原性(如维生素C)会和CCK-8发生显色反应,增加吸光度。 2、药物中的金属对CCK-8显色有影响: 当终浓度为1mM的氯化亚铅、氧化铁、硫酸铜会抑制5%,15%, 90%的显色反应,使灵敏度降级。 如果终浓度是10mM的话,将会100%抑制。 解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK-8,测定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基(加CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK-8之前更换培养基,去掉药物的影响。 3、由于培养基中可能含有氧化还原反应的物质,在正式实验之前,建议使用一个孔作一下检测,有必要先确认培养基和CCK-8是否反应,一般正常的OD值应该在0.4以下。
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Q:cck8检测数据为什么重复性差?1、孔板最外圈试剂容易挥发,建议最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。 2、CCK-8沾壁,建议加入CCK-8后,轻轻敲击培养板以帮助混匀。 3、细胞数量过多或过少,建议预先在1000-100000个/孔范围内摸索条件。 4、孔内气泡干扰酶标仪检测,检测前需确保每个孔内无气泡。
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Q:cck8试剂盒为什么测出的吸光度数值较低?1、细胞数量过低。可以适当增加细胞待测数量。 2、染色难度大,建议增加CCK-8孵育时间。
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Q:cck8细胞存活率测定公式计算是什么?
活力计算:细胞活力×(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
【注】A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
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