做细胞加药实验时,药物对CCK-8测定是否有影响?
1、注意如果药物具有还原性(如维生素C)会和CCK-8发生显色反应,增加吸光度。
2、药物中的金属对CCK-8显色有影响:
当终浓度为1mM的氯化亚铅、氧化铁、硫酸铜会抑制5%,15%, 90%的显色反应,使灵敏度降级。
如果终浓度是10mM的话,将会100%抑制。
解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK-8,测定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基(加CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK-8之前更换培养基,去掉药物的影响。
3、由于培养基中可能含有氧化还原反应的物质,在正式实验之前,建议使用一个孔作一下检测,有必要先确认培养基和CCK-8是否反应,一般正常的OD值应该在0.4以下。