常见问题-试剂产品问题解答-和元李记

Q：RPMI1640培养基为什么会变色？
我们平时在使用RPMI1640培养基时，是不是就会出现使用一半或者刚打开一段时间的RPMI1640培养基会变成粉色、紫色、玫瑰红等颜色，这是什么原因导致的呢？其实，我们在购买RPMI1640培养基时，在成分表上基本上都会看到碳酸氢钠、酚红这两种成分，可以说这两种成分是造成RPMI1640培养基变色的主要原因。我们首先看一下碳酸氢钠，在培养基开封后，碳酸氢钠会分解生成CO2，导致培养基偏碱。此时我们可以将培养瓶拧松放置于CO2培养箱中一段时间后，培养基颜色会变正常。此外酚红也会导致RPMI1640培养基变色，在培养基中的PH偏高时，酚红也会变化颜色。细胞在培养基中产生代谢产物，这些物质也会造成酸碱度的变化。因此RPMI1640培养基变色的根本原因就是培养基的PH值发生了变化。当培养基的pH值大于7时，颜色会偏向紫色；反之，如果pH值小于7，则颜色偏向黄色。
Q：BrdU法和CCK-8法有何区别？
CCK-8法是通过检测对数生长期的细胞内的脱氢酶来反映细胞的活性，而BrdU法是检测细胞的DNA合成。 CCK-8法只需要加入试剂，通过比色法就可以检测，而BrdU法不仅要加入试剂，而且要固定细胞，通过抗原抗体反应之后用发光法来检测。两者的原理是完全不同的。如果只是检测细胞增殖的话，那么CCK-8的方法是比较简便的。
Q：细菌是否会和CCK-8试剂发生反应？(如果想要检测细菌)
CCK-8试剂几乎不会和细菌发生显色反应。细菌防御系统非常强，不会发生还原反应。
Q：悬浮细胞和贴壁细胞在接种数量上有何区别？
大部分悬浮细胞相比贴壁细胞比较难显色，O.D.值偏低，一般需要增加细胞接种数量或延长加入CCK-8后的培养时间。贴壁细胞显色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。
Q：CCK-8对于不同的细胞，灵敏度是否一样？
不同细胞的脱氢酶活性不一样，显色程度不一样，因此灵敏度也不一样。
Q：若想提高转染效率，应该注意什么？
1：转染时细胞的密度90%-95%。 2：转染时，核酸和脂质体稀释液要用MEM无血清培养基。 3：转染后4-6h可选择换液。
Q：细胞冻存为什么要添加保护剂?
细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术。细胞在不加任何保护剂的情况下冷冻，细胞内外的水分会很快形成水晶从而引发一系列的不良反应：首先，部分蛋白质因局部电解质浓度增高和pH值改变而变性，导致细胞内部空间结构发生改变。其次，细胞内冰晶的形成和细胞膜系统上蛋白质，酶的变性等会限碍细胞的能量代谢。再次，胞膜上的类脂蛋白复合体在冷冻中易发生破坏引起胞膜通透性的改变，使细胞内容物丧失。最后，随着冷冻温度的降低，冰晶体积膨胀造成DNA的空间结构发生损伤从而引起细胞死亡。添加冷冻保护剂可以很好的改善细胞的破坏与死亡情况。
Q：冻存液配多了，不想浪费，可以留到下次用吗？
配好的冻存液在 4℃ 可以暂存 1 周，在 -20℃ 最多可保存一个月。不过最好还是现配现用、避免反复冻融。
Q：细胞复苏后只有非常少量细胞贴壁，是不是需要重新复苏？
先不要着急丢掉！可以补加血清和细胞因子，或者每隔 2-3 天换新鲜的生长培养基，经过 2-3 次换液后，大部分细胞就能看到明显增殖，此时再按照正常传代操作即可。当然，如果细胞库存充足，或者着急做实验，可以重新复苏一株细胞~
Q：为什么我复苏细胞的时候明明已经贴壁了，第二天再去看发现细胞全死了？
可能是细胞冻存之前消化过度，导致细胞凋亡，因此消化细胞时一定要严格控制消化时间哦！

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