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高效进行细胞冻存应该注意什么?
1)缓慢冷冻
慢冻可使细胞逐步脱水,细胞不会因产生大的冰晶而受到损害。相反,细胞内若出现大结晶会引起细胞膜、细胞器的损伤和破裂。
2)细胞活力及浓度
细胞应在生长良好、致密度约为80-90%活力达90%以上的状态下冻存。细胞活力差的细胞在冻存后的成活率很小,因此,一定要在细胞旺盛分裂时期冻存。
3)冻存密度
冻存时细胞密度少于5x105个活细胞/mL时,很难成功复苏。
4)冻存管盖子
冻存管的盖子一定要拧紧,否则水浴复苏时水会渗入造成污染。
5)冻存时间
细胞不可长期保存在-80℃冰箱中。