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总RNA柱式提取试剂盒

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产品货号
产品规格
原价
  • AN51L518
    100T
    898
产品说明 产品FAQ COA 产品文献 MSDS

产品描述
本试剂盒可以快速从细胞、细菌和部分动物组织中提取高质量的总 RNA,不使用酚和氯仿等有毒物质。试剂盒中裂解液(Lysis Buffer)含有强变性剂和 RNA 酶抑制剂,能够迅速裂解样品并失活 RNA 酶,确保操作过程中 RNA 的完整性。提取得到的总 RNA 可用于 RT-PCR、qPCR、Northern blotting、cDNA 文库构建等多种实验。整个提取过程仅需 10 min,操作简单快速、稳定性高。本试剂盒仅适用于部分组织类型,包括肝脏、肠、脑、脾脏和柔软的肿瘤组织,不适用于肺、心脏、皮肤、骨骼、肌肉等坚韧的组织。
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产品名称

货号

规格

总RNA柱式提取试剂盒

AN51L518

100T

产品组分

组分

100T

Lysis Buffer 

60 mL

Wash Buffer* 

12 mL

Elution Buffer 

10 mL

RNA纯化柱(带收集管) 

100套

◆Wash Buffer使用前请加入48ml无水乙醇,摇匀后使用。

运输与保存
常温运输。常温保存,有效期12个月。
使用方法
一、 样品裂解
1. 贴壁培养的细胞
(1) 移除培养基,PBS洗一次;
(2) 在培养板中加入500 μL的Lysis Buffer (<3×10^6
个细胞),水平放置片刻,再用枪头吹吸或搅拌数次,直至
细胞完全裂解。转移至1.5mL离心管中,用力反复吹打数次,充分裂解直到看不到细胞团为止,然后进
行步骤二;
注:(1) 细胞样品建议用6孔板或35mm培养皿培养细胞,培养至合适的密度进行 RNA提取 (24孔板培养的细
胞培养至90%以上的细胞密度也可使用)。 (2) 不方便直接裂解的培养容器,可以使用细胞刮刮下细胞或
者胰酶消化后,将细胞收集到离心管中。 (3) 对于T细胞/B细胞等体积很小、RNA含量很低的细胞,建
议增加细胞数到至少1×10^6
以上。
2. 悬浮培养的细胞
(1) 取1~3×106
个细胞的悬液至1.5 mL离心管,1000 g离心1 min收集细胞;
(2) 去上清,加入500 μL的Lysis Buffer,用力吹吸10次,vortex 10 s,保证细胞完全裂解,看不到细胞团,
然后进行步骤二。
3. 细菌细胞
5,000 rpm离心3 min收集适量的菌体(<5×10^8
),弃去上清,加入100μL含有溶菌酶的TE buffer,吹打混
匀,室温静置孵育数分钟。加入500 μL的Lysis Buffer,剧烈振荡20 s,12,000rpm离心1~2 min,取上清,然
后进行步骤二。
4. 动物组织(适合肠、肝、脑、脾、肿瘤,不适用肺、心、皮肤等坚硬组织)
(1) 匀浆器匀浆:切取新鲜组织10~50mg至1.5 mL离心管中,加入500 μL的Lysis Buffer,用组织匀浆机彻底
匀浆组织,直至无肉眼可见的组织块。12,000 rpm离心1~2 min。
(2) 液氮研磨:在液氮中将10~50mg组织充分研磨,将研磨成粉的样品转移至离心管中,加入加入500 μL的
Lysis Buffer,剧烈振荡20 s,12,000rpm离心1~2 min。
(3) 转移不超过400μL上清至新离心管中。切勿吸取管底沉淀和泡沫。
二、RNA提取
1. 细胞样品
较精确估计裂解液体积,向细胞裂解液中加入等体积的无水乙醇,将离心管剧烈颠倒几次,或用移液器
用力吹吸数次,充分混匀,然后将液体转移至离心柱上,进行步骤3。【注】:可能会产生沉淀,这是正常现象
,不影响提取过程,继续后续操作。
2. 组织样本
较精确估计裂解液体积,向裂解液中加入0.5倍体积的无水乙醇(或等体积的70%乙醇),将离心管剧烈
颠倒几次,或用移液器用力吹吸数次,充分混匀,然后将液体转移至离心柱上。
3. 7,000 rpm离心1 min(如离心柱上仍有液体残留可增加转速至12,000 rpm),弃废液。
4. 向RNA柱中加入500 μL的Wash Buffer,12,000 rpm离心1 min。
5. 倒掉废液,将RNA柱装回收集管,12,000 rpm空管离心1 min,完全去除残留的Wash Buffer。
6. 取出RNA吸附柱,放入一个RNase-free的1.5mL离心管中,开盖晾干1 min。向RNA柱的膜中心部位加入
25~50uL的Elution buffer,室温静置1 min。
7. 12,000 rpm离心1 min。样品可长期保存至-80℃。【注】:加洗脱液体积不应少于25uL,否则会影响回
收率,为了获得更大浓度的RNA,可将离心的RNA溶液重新加入到吸附柱,重复洗脱一遍。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 加入Lysis Buffer后,一定要充分振荡,保证RNA提取的效果;如果混合液非常粘稠难以转移,明显样品
量过多,增加Lysis buffer用量或减少样本用量。
3. 细胞或组织裂解产物,上柱前需要加入无水乙醇,充分混匀之后加入离心柱离心。
4. 使用的样本避免反复冻融,以免影响RNA的产率和质量。
5. 关于RNA纯度:OD260/OD280和 OD260/OD230比值是衡量 RNA 纯度的指标,高质量的RNA,
OD260/OD280的值在1.9-2.2之间,OD260/OD230大于 1.8(比较纯净的比值大于2.0)。本试剂盒提取
RNA,使用Nanodrop等微量分光光度计测定OD 260/280在1.90~2.2之间,OD260/230在2.0~2.2之间均属
正常。
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本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

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