EZ Trans siRNA转染试剂-转染试剂-和元李记

EZ Trans siRNA转染试剂

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产品描述

EZ Trans siRNA转染试剂，是一种基于阳离子高分子聚合物开发的新型转染试剂，适用于siRNA 及microRNA (miRNA) 的转染。本产品能在多种常见细胞中实现高效率、低毒性的转染效果，且具有操作简便，重复性佳等优点，适用于 siRNA或miRNA 介导的基因抑制实验。

订购信息

运输与保存

蓝冰运输。4℃保存，有效期 6个月；-30℃至-10℃保存，有效期12个月。注：避免反复冻融。

使用方法（以 24 孔板为例，其他培养皿中转染请参考表 1）

1．接种细胞

对于贴壁细胞：转染前一天，将细胞按照每孔1-2x10^5个细胞的量进行铺板，使其在转染时密度为60%-80% 为佳。

对于悬浮细胞：转染当天，配制转染试剂-核酸复合物之前，用PBS清洗细胞1-2次，用250 μL Opti-MEM I 减血清培养基 (无血清) 重悬细胞，在24孔板中进行细胞铺板，细胞密度为60-80%。

2．准备转染试剂-siRNA复合物（或转染试剂-miRNA复合物）

(1) 对于每孔细胞，取2 μLsiRNA (20 μM，DEPC水溶解)加入到1.5mL离心管中，加入2 μL转染试剂与siRNA 混合，室温孵育3 min。

(2) 往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I减血清培养基(无血清)，轻轻混匀，在室温下静置30 min，形成转染试剂-核酸复合物。

(3) 30 min后，往上述复合物中加入250 μLOpti-MEM I减血清培养基(无血清)，轻轻混匀。

3．转染细胞

(1) 细胞用 PBS 清洗 1-2 次，将上述 350µL 转染试剂-siRNA 复合物加入每孔细胞。可在转染 6h 后换液或者补充 150μL 培养基 (含血清)，总体积达到 500μL，即达到常规的培养皿使用培养液的量。

(2) 在 37℃，5% CO2 培养箱培养 24-48 h，之后即可检测基因干扰效果或者后续功能实验。

注意事项

1、本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2、小 RNA(siRNA/miRNA)质量：请务必使用高纯度无内毒素转染级 RNA。

3、整个实验过程使用无 RNA 酶和无热原性的材料，如离心管、枪头、缓冲液。

4、细胞条件：细胞状态会极大影响转染效率，待转染细胞应处于良好生长状态，建议使用生长处于指数期、存活率大于 90% 的细胞进行转染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。

5、siRNA 与转染试剂使用比例：对于大多数细胞系，转染复合物中siRNA (20 μM Stock)与转染试剂的比例在1:1 至1:3 之间，推荐比例为1:2。想要获得最优的基因干扰结果，需要对这一比例进行优化。

6、由于某些特殊培养基中的成分可能会抑制阳离子聚合物介导的转染，因此建议测试这些培养基与本产品的相容性，以确保最佳转染效果。

7、细胞类型、基因特性、siRNA/miRNA 的效力、靶 mRNA 的半衰期和靶蛋白的周转率等因素都会影响siRNA/miRNA 介导的基因敲低效果。

8、建议 siRNA/miRNA 工作浓度在 10-100nM 之间，转染试剂的体积应根据 siRNA/miRNA 浓度和培养皿的大小进行调整，请参见表 1。

表 1：不同培养体积对应的待转siRNA/miRNA、 EZ Trans、稀释液用量

注：该表使用量仅供参考，具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。a: 稀释转染试剂-RNA复合物所需培养基的量；b: 加入转染试剂-RNA复合物的培养基的量。