“和元李记”由和元生物 (股票代码：688238) 和李记生物合资成立的，主营“李记生物”“Life-ilab”试剂品牌
产品描述
Protein A磁珠为直径200nm的纳米磁珠，表面共价结合大量重组Protein A蛋白。纳米级磁珠由于高的表面积与体积比，会提供更多结合位点，磁珠使用量更少，非特异性吸附率低。重组Protein A 蛋白更适合于结合mouse IgG2a, IgG2b, IgA, rabbit IgG, 以及human IgG1, IgG2 和IgG4。本产品广泛应用于细胞裂解液、细胞培养上清、血清、腹水等样品中的抗原免疫沉淀（IP）或免疫共沉淀（Co-IP）。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
Protein A磁珠 | AP62L112 | 1 mL |
Protein A磁珠 | AP62L113 | 5*1 mL |
运输与保存
蓝冰运输。4℃保存，有效期24个月。注：避免冻融或离心磁珠。
技术参数
基质 | 硅基磁珠 |
配体 | 重组Protein A蛋白 |
粒径 | 200nm |
磁珠浓度 | 10mg/mL |
结合能力 | ≥0.9mg hIgG/mL磁珠 |
适用范围 | IP，Co-IP，ChIP，RIP等 |
使用方法
（一）样本制备
对于贴壁细胞样品：
1. 移除培养基，用PBS洗涤细胞两次。
2. 收集细胞至1.5 mL EP管内，按比例加入IP Lysis/Wash Buffer，同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20min，期间需多次轻轻翻转混合以促进细胞裂解。
3. 在4°C条件下，12000-16000g，10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验，或存放于-80°C长期保存。
表1.培养皿IP Lysis/Wash Buffer推荐使用体积
培养皿大小/表面积 | IP Lysis/Wash Buffer体积 |
100 mm | 500-1000 µL |
60 mm | 100-300 µL |
6孔板 | 100-200 µL |
对于悬浮细胞样品：
1. 在4°C条件下，500-1000g，10min，收集细胞，弃上清。
2. PBS重悬细胞，4℃，500-1000g，10 min，收集细胞，弃上清。
3. 用预冷的IP Lysis/Wash Buffer重悬细胞。每50 mg细胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer。同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min，期间需多次轻轻翻转混合以促进细胞裂解。
4. 在4°C条件下，12000 -16000g，10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验，或存放-80℃长期保存。
对于血清样品：
通常建议使用IP Lysis/Wash Buffer将血清样品稀释至目标蛋白的最终浓度介于50至150 µg/mL。稀释后的样品可置于冰上以备用，或存放于-20℃以便长期保存。
（二）免疫复合物的制备
以下实验方案针对 2-10ug 亲和纯化的抗体，根据需要可以按比例放大。
1. 在离心管中将每个样品的细胞裂解液与2-10ug 免疫沉淀抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为500-1500ug。
2. 用IP Lysis/Wash Buffer将抗体以及制备好的样品稀释至 300-500μL。
3. 在室温下旋转孵育1-2 h, 或 4℃ 2-4 h，以形成抗体和目标蛋白的免疫复合物。
注：样品所需的量和孵育时间均依赖于每个特定的抗体和抗原体系，因而可能需要优化，以达到最佳效果；建议使用相应的同种亚型抗体对照，以便在你的抗体免疫沉淀中显示特异性结合。
（三）免疫沉淀
注：为保证磁珠均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠。
1. 将25-50µL Protein A磁珠加入1.5 mL离心管中。
2. 向磁珠中加入500 µL预冷PBS，轻柔混匀，使用磁力架分离磁珠，弃去上清。
3. 向离心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer，颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀1min。用磁力架分离磁珠，弃去上清。
4. 将抗原样品/抗体免疫复合物加入装有磁珠的离心管中，混匀仪上室温孵育1-2 h，或 4℃，2-4 h。
5. 用磁力架分离磁珠，除去未结合的样品，并保存以备分析。
6. 向离心管中加入1000 µL IP Lysis/Wash Buffer，轻柔混匀5-10min，收集磁珠，弃上清。再重复洗两次。
7. 变性洗脱：向离心管中加入80-100 µL SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（1×），将样品置于100℃水浴或者金属浴中加热10 min。通过磁力架分离磁珠，收集含有目的抗原的上清进行后续实验。注：当使用的一抗检测分子量在50或25kDa范围内的蛋白质时，建议使用构象特异性二抗进行检测，以尽量减少抗体重链或轻链的干扰；如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脱方式：
低pH洗脱：此方法为非变性洗脱法，洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。向离心管中加入100 µL 洗脱液（0.1M 甘氨酸，pH2.5），混匀在室温下孵育离心管5-10 min。接着置于磁力架上静置约30s，待磁吸完全后，收集上清至新的Ep管，并立即加入20 μL的中和缓冲液（1M Tris-HCl，pH8.0），将洗脱产物pH调节至中性，样品用于后期功能分析。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。
3. 在免疫共沉淀（IP）实验中，不同类型的抗体与其对应抗原之间的亲和力可能有所不同，并且这种结合效率还可能受到IP Lysis/Wash Buffer的影响。若当前实验步骤未能获得理想结果，建议调整操作细节或自行筛选及配制适合的缓冲液，也可使用李记生物相关试剂，详见底部。
4. Protein A、Protein G和Protein A/G与不同种类的免疫球蛋白（Ig）及其亚类的结合强度表，请详见官网www.life-ilab.com
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