链霉亲和素磁珠-免疫磁珠-和元李记

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链霉亲和素磁珠

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产品货号

产品规格

原价

AP62L182

1mL

700
AP62L183

5*1mL

3000

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产品描述

链霉亲和素磁珠，也称 Streptavidin 磁珠或 SA 磁珠，是粒径为 200nm 的纳米磁珠，表面共价结合了大量的高质量的链霉亲和素。Streptavidin纳米级磁珠由于高的表面积与体积比，会提供更多结合位点，磁珠使用量更少，非特异性吸附率低，可以快速、高效、灵敏、特异性地与生物素（Biotin）标记的抗体、核酸、蛋白、多肽、凝集素等分子结合。主要用于分离纯化生物素标记的核酸、抗体、蛋白或相关复合物等，用于免疫沉淀（IP）、细胞分选、DNA-蛋白相互作用研究等。

订购信息

产品名称	货号	规格
链霉亲和素磁珠	AP62L182	1 mL
链霉亲和素磁珠	AP62L183	5*1 mL

运输与保存

蓝冰运输。4℃保存，有效期12个月。注：避免冻融或离心磁珠。

技术参数

基质	硅基磁珠
配体	重组 Streptavidin 蛋白
粒径	200nm
磁珠浓度	10mg/mL
结合能力	≥0.5mg 生物素化 IgG/mL 磁珠
适用范围	分离纯化：结合生物素化核酸等；分子相互作用：IP，Co-IP，RNA Pulldown 等。

使用方法

（一）结合生物素化分子操作流程

使用前自备缓冲液：以下是常用的缓冲液成分，用户可根据需要调整盐浓度和pH

缓冲液

配方

Buffer 1（适用于结合生物素化核酸）

10mM Tris-HCl(pH 7.5)，1mM

EDTA，1M NaCl，0.01-0.2% Tween-20

Buffer 2（适用于结合生物素化抗体/蛋白）

PBS（pH7.4）,0.05% Tween 20，可根据需要添加 0.01-0.1%BSA

1. 结合生物素化核酸：

(1) 将磁珠置于漩涡振荡器上20s，振荡重悬磁珠。用移液器移取 100μL 磁珠到新的离心管中。将离心管置于磁力架上，静置 1min（此操作后续简称为磁性分离），用移液器吸去上清液，从磁力架上取下离心管。

(2) 加入1mL Buffer 1 到离心管中，盖上离心管盖，充分振荡重悬磁珠。磁性分离，移去上清液。

(3) 重复“步骤 1 (2)”一次。

(4) 加入 500μL 的用 Buffer 1稀释的生物素化核酸，充分振荡重悬磁珠。将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混合 30min。

(5) 磁性分离，将上清液转移至新的离心管。按“步骤1 (2)”的方法洗涤磁珠 3 次。

(6) 根据后续实验的要求，加入合适的低盐缓冲液，重悬磁珠。至此结合生物素化核酸步骤完成。磁珠可用于后续操作。

(7) 用户可以通过测定反应前后核酸的浓度，计算结合到磁珠上的核酸量（反应前浓度-反应后浓度）×反应溶液体积。

2. 结合生物素化抗体/蛋白：

(2) 加入 1mL Buffer 2 到离心管中，盖上离心管盖，充分振荡重悬磁珠。磁性分离，移去上清液。

(3) 重复“步骤 2 (2)”两次，共洗涤 3 次。

(4) 加入 1mL 的用 Buffer 2 稀释的生物素化抗体/蛋白，充分振荡重悬磁珠。将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混合 60 min。

(5) 磁性分离，将上清液转移至新的离心管。按“步骤2 (2)”的方法洗涤磁珠5次。

(6) 根据后续实验的要求，加入合适的缓冲液，重悬磁珠。至此结合生物素化抗体/蛋白步骤完成。磁珠可用于后续操作。

（二）生物素化抗体免疫沉淀操作流程

1．免疫复合物的制备：

以下实验方案针对 2-10ug 生物素化抗体，根据需要可以按比例放大。

(1) 在离心管中将每个样品的细胞裂解液与2-10ug 免疫沉淀抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为500-1500ug。

(2) 用IP Lysis/Wash Buffer将抗体以及制备好的样品稀释至 300-500μL。

(3) 在室温下旋转孵育1-2 h, 或 4℃ 2-4 h，以形成抗体和目标蛋白的免疫复合物。

注：样品所需的量和孵育时间均依赖于每个特定的抗体和抗原体系，因而可能需要优化，以达到最佳效果；建议使用相应的同种亚型抗体对照，以便在你的抗体免疫沉淀中显示特异性结合。

2．免疫沉淀：

注：为保证磁珠均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠。

(1) 将25-50µL 链霉亲和素磁珠加入1.5 mL离心管中。

(2) 向磁珠中加入500 µL预冷PBS，轻柔混匀，使用磁力架分离磁珠，弃去上清。

(3) 向离心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer，颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀1min。用磁力架分离磁珠，弃去上清。

(4) 将抗原样品/抗体免疫复合物加入装有磁珠的离心管中，混匀仪上室温孵育1-2 h，或 4℃，2-4 h。

(5) 用磁力架分离磁珠，除去未结合的样品，并保存以备分析。

(6) 向离心管中加入1000 µL IP Lysis/Wash Buffer，轻柔混匀5-10min，收集磁珠，弃上清。再重复洗两次。

(7) 变性洗脱：向离心管中加入80-100 µL SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（1×），将样品置于100℃水浴或者金属浴中加热10 min。通过磁力架分离磁珠，收集含有目的抗原的上清进行后续实验。注：当使用的一抗检测分子量在50或25kDa范围内的蛋白质时，建议使用构象特异性二抗进行检测，以尽量减少抗体重链或轻链的干扰；如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脱方式：

低pH洗脱：此方法为非变性洗脱法，洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。向离心管中加入100 µL 洗脱液（0.1M 甘氨酸，pH2.5），混匀在室温下孵育离心管5-10 min。接着置于磁力架上静置约30s，待磁吸完全后，收集上清至新的Ep管，并立即加入20 μL的中和缓冲液（1M Tris-HCl，pH8.0），将洗脱产物pH调节至中性，样品用于后期功能分析。

注意事项

1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2. 请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。

3. 实验中 SA 与生物素化分子结合的能力是有区别的，结合还会受到 Buffer 的影响，因此可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。

4. 如需生物素分子与 SA 磁珠分离，可采用：① 0.1% SDS，煮沸 5min；② pH=8.2，含95%甲酰胺的 10mM EDTA 中，65℃ 5min 或 90℃ 2min。脱落率 95%。

5. 磁珠使用前应充分振荡均匀。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。