“和元李记”由和元生物 (股票代码：688238) 和李记生物合资成立的，主营“李记生物”“Life-ilab”试剂品牌
产品描述
间充质干细胞无血清培养基是一款无血清、无动物源成分的人脐带间充质干细胞培养产品，主要成分为：氨基酸，维生素、无机盐、白蛋白，转铁蛋白、胰岛素、微量元素，细胞因子等。
本产品可用于间充质干细胞的原代培养及多次传代，同时还能保持其多向分化的潜能，如分化为骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞的能力，使用时无需添加血清或血清替代物。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
间充质干细胞无血清培养基（HuMSC Medium-serum free） | AC01L212 | 500mL + 25mL |
产品组分
组分 | 规格 | 保存温度 |
A. 间充质干细胞无血清基础培养基 | 500 mL | 4℃ |
B. 间充质干细胞无血清添加剂 | 25 mL | -20℃ |
运输与保存
组分A蓝冰运输，4℃保存；组分B干冰运输，-20℃以下保存。有效期12 个月。
使用方法
1.培养基的配制
取500mL组分A，加入25mL 组分B，混合均匀即为间充质干细胞无血清培养基。注：如有需要，使用者可按照比例配制所需用量。
2. 间充质干细胞原代细胞分离与培养（以T75培养瓶为例）
(1) 取出脐带，将脐带外表面消毒并清洗去除血迹，剪成约2cm ~ 4cm的小块，去除动静脉，制成边长5mm ~10mm 的小块，置于T75培养基瓶中排列整齐，每瓶铺入15 ~ 20块。注：需要区分脐带外表皮侧和华通胶侧，保证华通胶侧贴在培养瓶底部。
(2) 将培养瓶翻转，置于CO2培养箱中，37℃静置60 min。
(3) 将培养瓶取出，向培养瓶中缓慢加入15mL 间充质干细胞无血清培养基，放入 37℃ 、5%CO2 培养箱中培养。
(4) 第 7天，每个T75培养瓶补加新鲜的间充质干细胞无血清培养基5mL。
(5) 补液后每3天进行半换液，吸出10mL 培养基弃掉，再加入10mL新鲜的间充质干细胞无血清培养基。
(6) 第13天开始，观察组织块，如组织块周围细胞融合度达到 90%，可收获细胞，否则继续每3天进行半换液至组织块周围细胞融合度达到90%。
3. 间充质干细胞传代培养与冻存（以T75 培养瓶为例）
(1) 将间充质干细胞无血清培养基平衡至室温。
(2) 清洗：取出细胞，吸出培养瓶中的培养基弃掉，每个T75培养瓶用10mL~15mL PBS 润洗细胞一次。
(3) 消化：加入 3ml 消化液，使消化液浸润整个细胞生长表面后，置于 CO2 培养箱中，37℃消化 2min ~ 6min，镜检观察，约 80% 以上细胞回缩变圆并脱落时，加入两倍体积间充质干细胞无血清培养基终止消化，吹打使细胞分散成单细胞，进行细胞计数。
注：若大部分细胞回缩变圆但不脱落，可轻轻拍打瓶壁使其脱落。若细胞不脱落，可延长消化时间。
(4) 收集：300g，5min 离心收集细胞沉淀，弃掉上清。
(5) 传代/冻存：若进行传代操作，用间充质干细胞无血清培养基重悬细胞，按照合适的接种密度（推荐8000个细胞/ cm2）将细胞接种到已加入平衡至室温的20mL间充质干细胞无血清培养基的 T75培养瓶中，放入 37℃、5%CO2 培养箱中继续培养。
若冻存细胞，则将步骤（4）中收集的细胞沉淀，按冻存密度加入适量细胞冻存液轻柔吹打重悬细胞并混匀，转移至细胞冻存管中，冻存管置于程序降温盒中，-80℃过夜，24h 后转移至液氮中进行长期保存。
4. 间充质干细胞复苏（以 T75 培养瓶为例）
(1) 将间充质干细胞无血清培养基平衡至室温，每个培养瓶加入15mL 的间充质干细胞无血清培养基。
(2) 取出冻存的细胞，置入 37℃水浴锅中快速解冻。
(3) 立即吸取解冻后的细胞悬液转移 1ml 至 15ml 离心管中，逐滴加入 4mL 间充质干细胞无血清培养基，混匀后计数。
(4) 根据计数结果，按照合适的接种密度（推荐 8000 个细胞/cm2）将细胞接种到已加入 15mL 间充质干细胞无血清培养基的细胞培养容器中。
注：若细胞冻存液中不含 DMSO，可将细胞直接加入 20mL 间充质干细胞无血清培养基中，且不用在第二天换液。
(5) 将细胞放在 37℃ ,5% CO2 培养箱中培养。
(6) 12h~24h 后，待细胞正常贴壁，弃去培养上清，加入新鲜的、已平衡至室温的 20ml 间充质干细胞无血清培养基。根据细胞生长情况，每 3天换液至细胞融合度达到 80%~90%。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 本产品不含抗生素，不建议添加抗生素。如果必须添加抗生素，则应优化培养条件。
3. 本产品不含有酚红，不含有血清及动物源成分，如有需要可额外添加。
4. 为了达到理想的细胞培养效果，本产品可以直接使用，也可以根据细胞类型或研究需求，额外添加需要的细胞生长因子或激素等。
5. 本产品培养细胞的效果可能因细胞来源、储存条件、样本质量、操作者经验而有所差异。
6. 产品应在指定的储存条件下存放，并在有效期内使用。
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本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
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