“和元李记”由和元生物 (股票代码：688238) 和李记生物合资成立的，主营“李记生物”“Life-ilab”试剂品牌
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产品描述
一站式鼠尾基因型快速鉴定试剂盒适用于从鼠尾、鼠耳、脚趾或其它组织快速提取基因组DNA，并进行PCR扩增，从而实现快速、便捷且准确的小鼠基因型鉴定(genotyping)及基因组的相关分析。
本试剂盒可在10-15 min内快速消化和提取鼠尾组织样品的基因组DNA，有效简化了鼠尾基因组DNA获取过程。本试剂盒还提供了预配制的2X PCR Master Mix (Green)，内含Taq DNA Polymerase，PCR Buffer，dNTP和上样缓冲液，只需加入适量引物、模板和水即可进行PCR扩增。PCR结束后，产物可直接进行电泳分析，方便快捷。
推荐组织用量
3~5mm2 小鼠尾尖 (2~3mm)
5~10mm2小鼠耳朵 (3~5mm)
1个小鼠脚趾
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
一站式鼠尾基因快速鉴定试剂盒（Direct Mouse Genotyping Kit） | AN11L217 | 200 T |
一站式鼠尾基因快速鉴定试剂盒（Direct Mouse Genotyping Kit） | AN11L218 | 500 T |
产品组分
组分 | AN11L217 | AN11L218 | 保存条件 |
A. DNA extraction solution | 15 mL | 40 mL | 室温 |
B. Stop solution | 15 mL | 40 mL | 室温 |
C. 2X PCR Master Mix | 3*1 mL | 8*1 mL | -20℃ |
运输与保存
蓝冰运输。组分按照保存条件保存，有效期12个月。
使用方法
1. 基因组提取步骤：
(1) 向每个样本中加入70 μL DNA extraction solution，确保组织完全浸没在溶液中。
(2) 在95℃的金属浴或水浴中裂解处理10-15 min。裂解完成后，组织在外观上仍然保持完整，但足量的基因组DNA已成功释放，不影响后续的PCR实验。
(3) 裂解后，短暂离心去除管盖内壁的液滴，然后在室温下静置2 min。随后加入70 μL终止液（Stop solution），轻轻混匀，终止裂解反应。
(4) 12000 rpm离心2 min，取上清液作为PCR模板。上清液在消化后可在4℃保存一个月，或在-20℃下保存一年。
2. PCR扩增步骤：
(1) 将2X PCR Master Mix（Green）置于冰浴或冰盒内，并准备PCR反应所需的引物、模板和水。
(2) 参考表1，在冰浴上配制PCR反应体系。
(3) 使用移液器轻轻吹打或轻微漩涡混合（Vortex）以确保充分混匀。随后，在室温下短暂离心几秒钟，使液体集中于管底。
(4) 将配制好的PCR反应体系放置在PCR仪中，启动PCR反应。
(5) 可参考表2设置PCR反应程序参数。PCR反应结束后，可直接进行琼脂糖凝胶电泳。
表1：PCR反应体系
成分 | 用量 |
Template | 2 μL |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 μL |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 μL |
2x PCR Master Mix | 10 μL |
ddH2O | 7 μL |
Total | 20 μL |
表2：PCR反应程序设定
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94 ℃ | 2 min | 1 |
变性 | 94 ℃ | 30s | 30~35 |
退火 | 55 ℃ | 30s | |
延伸 | 72 ℃ | 30s (1kb/min) | |
终延伸 | 72 ℃ | 10 min | 1 |
临时保存 | 4 ℃ | forever | ─ |
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. PCR产物少或没有条带。引物设计不佳是最常见的问题，需合理优化引物；在室温下配置反应体系易引发非特异性扩增，建议在冰浴中进行；退火温度不当可能影响结果，建议使用温度梯度PCR仪优化，或通过多次PCR反应找到最佳温度；延伸时间不足。建议每1 kb片段延伸1 min，难以扩增的片段可延长至1.5-2 min。
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