“和元李记”由和元生物 (股票代码：688238) 和李记生物合资成立的，主营“李记生物”“Life-ilab”试剂品牌
产品描述
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷且高质量的单链 cDNA 合成试剂盒，包含热稳定的 M-MLV GIII 逆转录酶及其反应缓冲液、RNA 酶抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和随机引物等所有逆转录反应所需组分，仅需添加 RNA 模板和水即可启动反应，生成的 cDNA 主要用于后续的 qPCR 分析。
提取的RNA 样本常存在基因组DNA（gDNA）污染，可能导致gDNA 与 cDNA 在 qPCR 中同时扩增，影响定量准确性。本试剂盒通过 dsDNase 高效去除gDNA，特异性降解双链 DNA或DNA-RNA 杂合链中的 DNA 链，并在逆转录温度下快速不可逆失活。与传统使用的 DNase I对比，无需额外 EDTA 处理，简化实验流程，降低逆转录反应的抑制风险。
本试剂盒可在同一管中进行逆转录和gDNA去除两个反应，操作简便，可有效降低复杂加样过程造成的样品污染和 RNA 降解的风险。但若基因组污染严重程度，建议选择采用去除gDNA 污染与逆转录分开进行的操作方法。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase) | AN33L718 | 20T |
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase) | AN33L719 | 100T |
产品组分
组分 | AN33L718（20T） | AN33L719（100T） |
A. All-in-One RT MasterMix | 80 μL | 400 μL |
B. dsDNase | 20 μL | 2*50 μL |
C. 10× dsDNase Buffer | 40 μL | 200 μL |
D. Nuclease-Free Water | 400 μL | 2*1 mL |
运输与保存
蓝冰运输。-20℃保存，有效期24个月。
使用方法
1. 针对基因组 DNA 含量低的 RNA 样品（推荐方案）
① 于冰上配制如下反应体系：
试剂 | 使用量 |
模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
All-in-One RT MasterMix | 4 μl |
dsDNase | 1 μl |
Nuclease-Free Water | To 20 μl |
a . 推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。
② 37℃温育 2 min，以去除gDNA 污染；
③ 55℃温育 15 min；
④ 反应结束后，85℃温育 5 min 以终止反应；
⑤ 迅速将获得的 cDNA 置于冰上，用于后续实验；或立即保存于 -20℃。
2. 针对基因组 DNA 含量高的 RNA 样品
(1) 基因组 DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反应体系：
试剂 | 使用量 |
模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
dsDNase | 1 μl |
10× dsDNase Buffer | 1 μl |
Nuclease-Free Water | To 10 μl |
a. 推荐采用试剂盒提取的 RNA 作为模板。
② 轻柔吸打混匀，瞬离；
③ 37℃温育 2 min，以去除基因组 DNA 污染；
注：若 RNA 中基因组 DNA 污染严重，可适当延长 37℃温育时间至 5 min。
④ 65℃温育 2 min，使 dsDNase 失活， 冰上放置。
(2) 第一链 cDNA 合成
① 于冰上配制如下反应体系：
试剂 | 使用量（实验组） |
“实验 (1)”反应产物 | 10 μl |
All-in-One RT MasterMix | 4 μl |
Nuclease-Free Water | To 20 μl |
② 轻柔吸打混匀，瞬离；
③ 50℃温育 15 min；
注：若目标 RNA 不含 Poly(A) 结构，可预先 25℃温育 10 min。
④ 反应结束后， 85℃温育 5 min，以终止反应；
⑤ 将获得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。
注：cDNA 溶液置于 -20℃储存，建议不超过 1 周；置于 -80℃可长期储存。
注意事项
1. 预混液中已包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物，适用于含有 Poly(A) 结构的真核生物 mRNA，以及不含 Poly(A) 结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不适用于 miRNA 等小RNA模板。
2. 由于随机引物会在RNA的任意位置启动逆转录，因此不建议使用本产品进行真核生物全长cDNA的克隆。
3. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
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