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All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)

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产品货号
产品规格
原价
  • AN33L718
    20T
    280
  • AN33L719
    100T
    880
产品说明 产品FAQ COA 产品文献 MSDS

产品描述

All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷且高质量的单链 cDNA 合成试剂盒,包含热稳定的 M-MLV GIII 逆转录酶及其反应缓冲液、RNA 酶抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和随机引物等所有逆转录反应所需组分,仅需添加 RNA 模板和水即可启动反应,生成的 cDNA 主要用于后续的 qPCR 分析。

提取的RNA 样本常存在基因组DNA(gDNA)污染,可能导致gDNA 与 cDNA 在 qPCR 中同时扩增,影响定量准确性。本试剂盒通过 dsDNase 高效去除gDNA,特异性降解双链 DNA或DNA-RNA 杂合链中的 DNA 链,并在逆转录温度下快速不可逆失活。与传统使用的 DNase I对比,无需额外 EDTA 处理,简化实验流程,降低逆转录反应的抑制风险。

本试剂盒可在同一管中进行逆转录和gDNA去除两个反应,操作简便,可有效降低复杂加样过程造成的样品污染和 RNA 降解的风险。但若基因组污染严重程度,建议选择采用去除gDNA 污染与逆转录分开进行的操作方法。

订购信息

产品名称

货号

规格

All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)

AN33L718

20T

All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)

AN33L719

100T

产品组分

组分

AN33L718(20T)

AN33L719(100T)

A.  All-in-One   RT MasterMix

80 μL

400 μL

B.  dsDNase

20 μL

2*50 μL

C.  10×   dsDNase Buffer

40 μL

200 μL

D.  Nuclease-Free   Water

400 μL

2*1 mL

运输与保存

蓝冰运输。-20℃保存,有效期24个月。

使用方法

1. 针对基因组 DNA 含量低的 RNA 样品(推荐方案)

① 于冰上配制如下反应体系:

试剂

使用量

模板 RNAa

50   ng~1 μg

All-in-One   RT MasterMix

4 μl

dsDNase

1 μl

Nuclease-Free   Water

To 20   μl

a . 推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。

② 37℃温育 2 min,以去除gDNA 污染;

③ 55℃温育 15 min;

④ 反应结束后,85℃温育 5 min 以终止反应;

⑤ 迅速将获得的 cDNA 置于冰上,用于后续实验;或立即保存于 -20℃。

2. 针对基因组 DNA 含量高的 RNA 样品

(1)  基因组 DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反应体系:

试剂

使用量

模板 RNAa

50   ng~1 μg

dsDNase

1 μl

10×   dsDNase Buffer

1 μl

Nuclease-Free   Water

To 10   μl

a.    推荐采用试剂盒提取的 RNA 作为模板。

② 轻柔吸打混匀,瞬离;

③ 37℃温育 2 min,以去除基因组 DNA 污染;

注:若 RNA 中基因组 DNA 污染严重,可适当延长 37℃温育时间至 5 min。

④ 65℃温育 2 min,使 dsDNase 失活, 冰上放置。

(2)  第一链 cDNA 合成

① 于冰上配制如下反应体系:

试剂

使用量(实验组)

“实验 (1)”反应产物

10 μl

All-in-One   RT MasterMix

4 μl

Nuclease-Free   Water

To 20   μl

② 轻柔吸打混匀,瞬离;

③ 50℃温育 15 min;

注:若目标 RNA 不含 Poly(A) 结构,可预先 25℃温育 10 min。

④  反应结束后, 85℃温育 5 min,以终止反应;

⑤ 将获得的 cDNA 溶液置于冰上,用于后续实验。

注:cDNA 溶液置于 -20℃储存,建议不超过 1 周;置于 -80℃可长期储存。

注意事项

1. 预混液中已包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物,适用于含有 Poly(A) 结构的真核生物 mRNA,以及不含 Poly(A) 结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板,但不适用于 miRNA 等小RNA模板。

2. 由于随机引物会在RNA的任意位置启动逆转录,因此不建议使用本产品进行真核生物全长cDNA的克隆。

3. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

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