“和元李记”由和元生物 (股票代码：688238) 和李记生物合资成立的，主营“李记生物”“Life-ilab”试剂品牌
产品描述
2 x Taq PCR Master Mix 是PCR 反应预混液，其中包含Taq DNA Polymerase、dNTPs、反应缓冲液、loading Dye 等成分，使用时只需取适量本产品，加入模板和引物，并加入 ddH2O 补足体积，使反应体系浓度为 1× 即可进行 PCR 反应。本产品最长可扩增 5kb DNA片段，具有良好的扩增特异性和模板兼容性， PCR 产物 3' 端带突出 A 碱基，纯化后可直接用于 T/A 克隆。
本产品中包含两种染料，PCR反应完成后无需额外添加 loading buffer，可以直接进行电泳，且电泳过程中会出现两个指示条带。该染料不影响 PCR 扩增效率，但对于需要对 PCR 产物进行吸光度、荧光等光学分析的实验，建议在分析前对 PCR 产物进行纯化，或使用无染料的PCR预混液。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
2 x Taq PCR Master Mix | AN11L818 | 2*1mL |
2 x Taq PCR Master Mix | AN11L819 | 5*1mL |
运输与保存
蓝冰运输。-20℃保存，有效期24个月。
使用方法
1. 常规 PCR 反应体系
组分 | 20 μL体系 | 50 μL体系 | 终浓度 |
2 x Taq PCR Master Mix | 10 μL | 25 μL | 1 x |
正向引物（10 μM）（1） | 0.4-0.8 μL | 1-2 μL | 0.2-0.4 μM |
反向引物（10 μM）（1） | 0.4-0.8 μL | 1-4 μL | 0.2-0.4 μM |
DNA 模板（2） | X μL | X μL | - |
ddH2O | To 20 μL | To 50 μL | - |
(1) 引物推荐终浓度为 0.2~0.4 μM，效果不佳时可以在 0.1~1 μM 浓度范围内进行调整；
(2) 不同模板最佳反应浓度有所不同，以 50 μL 体系为例：模板为基因组 DNA 时，一般推荐的使用量为 10~400 ng；当模板为质粒或病毒 DNA 时，一般推荐的使用量为 10 pg~20 ng。
2. 常规 PCR 反应程序
步骤 | 温度 | 时间 |
预变性（1） | 94℃ | 3~5 min |
变性 | 94℃ | 15 sec |
退火 | 53~65℃ | 15 sec |
延伸（2） | 72℃ | 30~60 sec/kb |
30~35 Cycles | ||
终延伸 | 72℃ | 5min |
(1) 该预变性条件适合绝大多数扩增反应， 对于一些复杂模板， 例如：菌液、菌落（尤 其是酵母）的PCR 扩增，预变性时间可适当延长至 10 min，以提高预变性效果；
(2) 关于延伸速率，当目的片段长度不超过 2 kb 时，推荐使用 30 sec/ kb；当目的片段长度大于 2 kb 时，推荐使用 60 sec/kb。延伸速率与模板复杂程度有关，如遇产率较低可适当提高延伸时间。
注：如果使用酵母菌液作为PCR 扩增模板，建议目的片段长度不超过2.5kb， 若超出2.5kb, 建议将酵母菌液预先进行破壁处理。
3. 凝胶浓度对应的染料迁移距离
琼脂糖凝胶浓度 | 金色条带 | 蓝色条带 |
0.8% | ~80 bp | 4000 bp |
1.0% | ~40 bp | 2000 bp |
1.5% | ~20 bp | 1500 bp |
2.0% | <10 bp | 1200 bp |
2.5% | <10 bp | 1200 bp |
3.0% | <10 bp | 1200 bp |
注：染料会影响吸光度。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 本产品在短期 -20℃ 储存时不会凝固，可以随取随用，如遇储存温度波动，体系结冰为正常现象不影响使用。
3. 建议将所有的反应组分在冰上配制，最后加入2 x Taq PCR Master Mix。
4. 使用基因组模板进行较长片段扩增需要使用高质量纯化的DNA模板，可以提高 PCR 成功率。
5. 本产品扩增产物可用于 T/A 克隆。由于本产品含有 Loading Dye，PCR 产物需经过切胶回收后才可充分去除 Loading Dye。
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本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
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